Действующий
6.3.3 Градуировочная характеристика считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата коэффициента корреляции для градуировочной характеристики каждого антибиотика составит не менее 0,98.
6.3.3 Градуировку проводят не реже одного раза в месяц, а также при изменении условий хроматографического анализа, при смене колонки, при замене реактивов или несоответствии результатов метрологическим требованиям.
6.4.1 Пробы молока и жидкой молочной продукции перемешивают путем перевертывания емкости с пробами не менее трех раз.
Пробы продуктов освобождают от упаковки, нагревают до температуры (20
2)°С, аккуратно перемешивают и сразу же проводят измерение.
2)°С, аккуратно перемешивают и сразу же проводят измерение.
6.4.2 Пробы продуктов, содержащие ароматизаторы, пищевкусовые добавки (кофе, какао, фруктово-ягодный или овощной наполнитель и т.д.), образующие с продуктом однородную структуру, а также неотделяемые пищевкусовые компоненты (например, кокосовую стружку), полностью освобождают от упаковки (при наличии), помещают в лабораторный стакан вместимостью 500 - 1000 
и нагревают на водяной бане до температуры (32
2)°С, после чего полностью переносят в стакан гомогенизатора и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 2000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20
2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
и нагревают на водяной бане до температуры (32 2)°С, после чего полностью переносят в стакан гомогенизатора и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 2000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20 2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
6.4.3 Пробы творога, творожных продуктов и творожных полуфабрикатов нагревают до температуры (20
2)°С, растирают в фарфоровой ступке до получения однородной консистенции и переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой.
2)°С, растирают в фарфоровой ступке до получения однородной консистенции и переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой.
6.4.5 Пробы мороженого освобождают от глазури и вафель, оставляют при комнатной температуре для отепления. Затем отделяют фрукты, орехи, изюм и другие отделяемые компоненты. При подготовке мороженого с наполнителями, обладающими текучестью (мягкая карамель, сироп, крем-брюле и т.д.), полностью растаявшее мороженое переносят в стакан гомогенизатора вместимостью от 500 
до 1000 
и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 1000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20
2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
до 1000 и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 1000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20 2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
6.4.6 Пробу сыра и сырного продукта измельчают на металлической терке с мелкой перфорацией и аккуратно перемешивают в ступке.
6.4.7 Пробу масла, масляной пасты помещают в стакан вместимостью 100 
, расплавляют на водяной бане при температуре (60
2)°С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
, расплавляют на водяной бане при температуре (60 2)°С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
6.4.8.1 В стакан вместимостью 100 
помещают (5,000
0,001) г продукта, подготовленного по 6.4.2 - 6.4.6. Добавляют 20 
раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) и аккуратно перемешивают. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 
, ополаскивая стакан раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки.
помещают (5,000 0,001) г продукта, подготовленного по 6.4.2 - 6.4.6. Добавляют 20 раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) и аккуратно перемешивают. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 , ополаскивая стакан раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки.
Затем колбы с раствором помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20
2)°С. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр. В случае получения непрозрачного раствора допускается его центрифугирование при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин.
2)°С. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр. В случае получения непрозрачного раствора допускается его центрифугирование при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин.
6.4.8.2 В мерную колбу вместимостью 50 
помещают (5,000
0,001) г масла, пасты масляной, подготовленных по 6.4.7, и добавляют 35 
раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Колбу помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20
2)°С. Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки. Полученную смесь центрифугируют при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин. Для анализа используем водную фракцию.
помещают (5,000 0,001) г масла, пасты масляной, подготовленных по 6.4.7, и добавляют 35 раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Колбу помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20 2)°С. Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки. Полученную смесь центрифугируют при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин. Для анализа используем водную фракцию.
В полипропиленовый флакон (виалу) вместимостью 15 
помещают (1,000
0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 
пробы продукта, подготовленной по 6.4.8, добавляют 0,1 
раствора внутреннего стандарта (6.1.6.3). Затем добавляют 3 
ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
помещают (1,000 0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 пробы продукта, подготовленной по 6.4.8, добавляют 0,1 раствора внутреннего стандарта (6.1.6.3). Затем добавляют 3 ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
Полученную водную фракцию переносят в мерную пробирку вместимостью 10 
и упаривают до 1 
на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 
буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
и упаривают до 1 на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
6.6 Подготовка проб для определения левомицетина, стрептомицина и антибиотиков пенициллиновой группы
В полипропиленовый флакон (виалу) вместимостью 15 
помещают (1,000
0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 
пробы продукта, подготовленной по 6.4.8. Затем добавляют 3 
ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
помещают (1,000 0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 пробы продукта, подготовленной по 6.4.8. Затем добавляют 3 ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
Полученную водную фракцию переносят в мерную пробирку вместимостью 10 
и упаривают до 1 
на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 
буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
и упаривают до 1 на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
Для проведения твердофазной экстракции картридж для ТФЭ предварительно кондиционируют 6 
50%-ного раствора метанола и уравновешивают 6 
деионизированной воды. Затем вносят пробу продукта, подготовленную по 6.5 или 6.6, и вновь промывают 6 
деионизированной воды. Антибиотики элюируют с сорбента при помощи 6 
раствора элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2). Полученный элюат упаривают на нагревательном модуле досуха в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С, затем растворяют раствором элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2) до 0,5 
, после чего используют для хроматографирования.
50%-ного раствора метанола и уравновешивают 6 деионизированной воды. Затем вносят пробу продукта, подготовленную по 6.5 или 6.6, и вновь промывают 6 деионизированной воды. Антибиотики элюируют с сорбента при помощи 6 раствора элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2). Полученный элюат упаривают на нагревательном модуле досуха в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С, затем растворяют раствором элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2) до 0,5 , после чего используют для хроматографирования.
5)°С;
25)%;
10) кПа;
5) Гц;
10) В.
8.1 Хроматографирование градуировочных растворов и анализируемой пробы продукта проводят в идентичных условиях.
Если содержание антибиотиков в анализируемой пробе превышает значение максимального градуировочного уровня, то анализируемую пробу разводят в 10 или более раз мобильной фазой А и проводят повторные измерения.
9.1 Обработка результатов измерений содержания антибиотиков тетрациклиновой группы, полученных с применением внутреннего стандарта
Определение содержания антибиотиков тетрациклиновой группы выполняют с помощью программного обеспечения, прилагаемого к хроматографу. С помощью программы обработки спектров вычисляют отношение площади пика определяемого антибиотика к площади пика внутреннего стандарта. Затем, используя программу обработки данных, рассчитывают содержание соответствующего антибиотика в подготовленной пробе.
9.2 Обработка результатов измерений содержания антибиотиков пенициллиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина
Определение содержания антибиотиков выполняют с помощью программного обеспечения, прилагаемого к хроматографу. Используя градуировочный график, рассчитывают значение массовой концентрации соответствующего антибиотика в подготовленной пробе.
,
где 
- масса пробы продукта, подготовленная по 6.4.2 - 6.4.7, взятая для анализа и отобранная по 6.4.9, г;
- масса пробы продукта, подготовленная по 6.4.2 - 6.4.7, взятая для анализа и отобранная по 6.4.9, г;
- объем пробы, подготовленный по 
, (
= 10 
);
- общий объем раствора, полученный при разведении пробы продукта согласно 
, (
= 50 
).
(мг/кг), вычисляют по формуле
,
;
- объем элюата после выпаривания по 
;