Соль динатриевая этилендиамин-N,N, , - тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б) по ГОСТ 10652, х.ч.

Стрептомицина сульфат, массовой долей основного вещества не менее 96%.

Тетрациклина гидрохлорид, массовой долей основного вещества не менее 90%.

Хлорамфеникол (левомицетин), массовой долей основного вещества не менее 99%.

Хлортетрациклин гидрохлорид, массовой долей основного вещества не менее 90%.

Феноксиметилпенициллин, массовой долей основного вещества не менее 99%.

Вода для лабораторного анализа деионизированная, с удельным сопротивлением 28 Ом, степень чистоты 2 по ISO 3696.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерения, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

5 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 26809.2, а также другим нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.

Если определение не может быть проведено сразу после отбора проб, их хранят в холодильнике при температуре (4 2)°С не более 48 ч.

6 Подготовка к проведению измерений

6.1 Приготовление растворов

6.1.1 Приготовление раствора лимонной кислоты молярной концентрации с ( ) = 0,1

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают (21,000 0,001) г лимонной кислоты, растворяют в небольшом количестве деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки.

Раствор хранят при температуре (20 2)°С не более 1 мес.

6.1.2 Приготовление раствора натрия фосфорнокислого молярной концентрации с ( ) = 0,2

В мерную колбу вместимостью 1000  вносят (35,600 0,001) г натрия фосфорнокислого, растворяют в небольшом количестве деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки.

Раствор хранят при температуре (20 2)°С не более 1 мес.

6.1.3 Приготовление буферного раствора

В конической колбе вместимостью 250  смешивают 60  раствора лимонной кислоты молярной концентрации 0,1 (6.1.1) и 40  раствора натрия фосфорнокислого молярной концентрации 0,2 (6.1.2), добавляют (37,200 0,001) г трилона Б, аккуратно перемешивают и измеряют значение рН полученного раствора. Значение рН должно составлять 4,0. При необходимости значение рН доводят до 4,0 ед. рН ортофосфорной кислотой.

Раствор хранят при температуре (20 2)°С не более 1 мес.

6.1.4 Приготовление растворов элюентов мобильной фазы А и Б

6.1.4.1 Для приготовления раствора элюента мобильной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000  помещают 200  деионизированной воды, добавляют 5  муравьиной кислоты и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки, фильтруют через нейлоновый фильтр.

Раствор хранят при температуре (20 2)°С не более 1 мес.

6.1.4.2 Для приготовления раствора элюента мобильной фазы Б в мерную колбу вместимостью 1000  помещают 200  метанола, добавляют 5  муравьиной кислоты и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят метанолом до метки, фильтруют через нейлоновый фильтр.

Раствор хранят при температуре (20 2)°С не более 1 мес.

6.1.5 Приготовление 50%-ного раствора метанола

В мерную колбу вместимостью 50  помещают 25,0  метанола, добавляют небольшое количество деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки. Колбу помещают на ультразвуковую баню на 5 мин.

Срок хранения раствора в темной посуде при температуре (4 2)°С - не более 1 мес.

6.1.6 Приготовление градуировочных растворов

6.1.6.1 Приготовление основных градуировочных растворов

6.1.6.1.1 В мерную пробирку вместимостью 10  помещают по 10 мг доксициклина, окситетрациклина гидрохлорида, тетрациклина гидрохлорида и хлортетрациклина гидрохлорида, взвешенных с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5  метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.

6.1.6.1.2 В мерную пробирку вместимостью 10  помещают 10 мг стрептомицина сульфата, взвешенного с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5  метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.

6.1.6.1.3 В мерную пробирку вместимостью 10  помещают 10 мг хлорамфеникола (левомицетина), взвешенного с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5  метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.

6.1.6.1.4 В мерную пробирку вместимостью 10  помещают по 10 мг феноксиметилпенициллина, бензилпенициллина, взвешенных с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5  метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.

6.1.6.1.5 Массовая концентрация каждого антибиотика в растворах по 6.1.6.1.1 - 6.1.6.1.4 составляет 1  (или 1000  ).

Уточненное значение концентрации антибиотика рассчитывается с учетом содержания основного вещества.

6.1.6.1.6 Раствор антибиотика массовой концентрации 0,1  (или 100  ) готовят из раствора антибиотика массовой концентрации 1  (6.1.6.1.5) путем его разведения метанолом в 10 раз.

Растворы хранят при температуре минус (20 2)°С не более 3 мес.

Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин, но не более 2 ч.

6.1.6.2 Приготовление градуировочных образцов

Для построения градуировочного графика готовят серию градуировочных образцов в количестве не менее пяти с массовыми концентрациями антибиотиков в диапазоне от 0,001  до 1  (для левомицетина в диапазоне от 0,00015  до 0,1  ) путем разбавления метанолом основных градуировочных растворов антибиотиков, приготовленных по 6.1.6.1.

6.1.6.3 Приготовление раствора внутреннего стандарта демеклоциклина

В мерную пробирку вместимостью 10  помещают 10 мг демеклоциклина, взвешенного с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5  метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.

Массовая концентрация раствора внутреннего стандарта демеклоциклина в растворе составляет 1  (уточненное значение концентрации внутреннего стандарта рассчитывается с учетом содержания основного вещества).

Путем нескольких разбавлений доводят массовую концентрацию раствора внутреннего стандарта демеклоциклина до значения 1  . Раствор с данной концентрацией используют для внесения в исследуемые образцы.

Раствор хранят при температуре минус (20 2)°С не более 3 мес.

Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин.