Действующий
В мерную колбу вместимостью 1000 помещают (21,000 0,001) г лимонной кислоты, растворяют в небольшом количестве деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки.
В мерную колбу вместимостью 1000 вносят (35,600 0,001) г натрия фосфорнокислого, растворяют в небольшом количестве деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки.
В конической колбе вместимостью 250 смешивают 60 раствора лимонной кислоты молярной концентрации 0,1 (6.1.1) и 40 раствора натрия фосфорнокислого молярной концентрации 0,2 (6.1.2), добавляют (37,200 0,001) г трилона Б, аккуратно перемешивают и измеряют значение рН полученного раствора. Значение рН должно составлять 4,0. При необходимости значение рН доводят до 4,0 ед. рН ортофосфорной кислотой.
В мерную колбу вместимостью 50 помещают 25,0 метанола, добавляют небольшое количество деионизированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят деионизированной водой до метки. Колбу помещают на ультразвуковую баню на 5 мин.
6.1.6.1.1 - 6.1.6.1.4 составляет 1 (или 1000 ).
6.1.6.1.5 Массовая концентрация каждого антибиотика в растворах по
6.1.6.1.5) путем его разведения метанолом в 10 раз.
6.1.6.1.6 Раствор антибиотика массовой концентрации 0,1 (или 100 ) готовят из раствора антибиотика массовой концентрации 1 (
Перед применением раствор выдерживают при комнатной температуре в темном месте не менее 20 мин, но не более 2 ч.
Для построения градуировочного графика готовят серию градуировочных образцов в количестве не менее пяти с массовыми концентрациями антибиотиков в диапазоне от 0,001 до 1 (для левомицетина в диапазоне от 0,00015 до 0,1 ) путем разбавления метанолом основных градуировочных растворов антибиотиков, приготовленных по 6.1.6.1.
В мерную пробирку вместимостью 10 помещают 10 мг демеклоциклина, взвешенного с точностью до 0,5 мг. Добавляют 5 метанола и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин. Объем полученного раствора доводят метанолом до метки.
Массовая концентрация раствора внутреннего стандарта демеклоциклина в растворе составляет 1 (уточненное значение концентрации внутреннего стандарта рассчитывается с учетом содержания основного вещества).
Путем нескольких разбавлений доводят массовую концентрацию раствора внутреннего стандарта демеклоциклина до значения 1 . Раствор с данной концентрацией используют для внесения в исследуемые образцы.
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования: с 0% до 55% мобильной фазы Б (6.1.4.2) за 25 мин.