Действующий
2)°С не более 3 мес.
6.2.1 Включают хроматограф. Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с Руководством по эксплуатации прибора.
;
;
1)°С;
Разделение проводят в режиме градиентного элюирования: с 0% до 55% мобильной фазы Б (6.1.4.2) за 25 мин.
6.2.3 Перед каждым измерением для оценки работы хроматографа проводят контрольное измерение, вводя в хроматограф образец с известным значением содержания антибиотика. В качестве такого образца может служить раствор антибиотика, приготовленный из реактива антибиотика с известным содержанием антибиотика.
6.3.2 Используя программное обеспечение, прилагаемое к хроматографу, строят график зависимости массовой концентрации антибиотика от отношения площади хроматографического пика антибиотика к площади пика внутреннего стандарта.
6.3.3 Градуировочная характеристика считается приемлемой, если рассчитанное значение квадрата коэффициента корреляции для градуировочной характеристики каждого антибиотика составит не менее 0,98.
6.3.3 Градуировку проводят не реже одного раза в месяц, а также при изменении условий хроматографического анализа, при смене колонки, при замене реактивов или несоответствии результатов метрологическим требованиям.
6.4.1 Пробы молока и жидкой молочной продукции перемешивают путем перевертывания емкости с пробами не менее трех раз.
Пробы продуктов освобождают от упаковки, нагревают до температуры (20
2)°С, аккуратно перемешивают и сразу же проводят измерение.
2)°С, аккуратно перемешивают и сразу же проводят измерение.
6.4.2 Пробы продуктов, содержащие ароматизаторы, пищевкусовые добавки (кофе, какао, фруктово-ягодный или овощной наполнитель и т.д.), образующие с продуктом однородную структуру, а также неотделяемые пищевкусовые компоненты (например, кокосовую стружку), полностью освобождают от упаковки (при наличии), помещают в лабораторный стакан вместимостью 500 - 1000 
и нагревают на водяной бане до температуры (32
2)°С, после чего полностью переносят в стакан гомогенизатора и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 2000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20
2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
и нагревают на водяной бане до температуры (32 2)°С, после чего полностью переносят в стакан гомогенизатора и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 2000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20 2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
6.4.3 Пробы творога, творожных продуктов и творожных полуфабрикатов нагревают до температуры (20
2)°С, растирают в фарфоровой ступке до получения однородной консистенции и переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой.
2)°С, растирают в фарфоровой ступке до получения однородной консистенции и переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой.
6.4.5 Пробы мороженого освобождают от глазури и вафель, оставляют при комнатной температуре для отепления. Затем отделяют фрукты, орехи, изюм и другие отделяемые компоненты. При подготовке мороженого с наполнителями, обладающими текучестью (мягкая карамель, сироп, крем-брюле и т.д.), полностью растаявшее мороженое переносят в стакан гомогенизатора вместимостью от 500 
до 1000 
и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 1000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 
с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20
2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
до 1000 и гомогенизируют в течение 1 - 3 мин при частоте вращения ножей от 1000 об/мин до 5000 об/мин до получения однородной массы. Затем пробу переносят в колбу вместимостью 500 с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20 2)°С. Пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации во избежание ее расслоения.
6.4.6 Пробу сыра и сырного продукта измельчают на металлической терке с мелкой перфорацией и аккуратно перемешивают в ступке.
6.4.7 Пробу масла, масляной пасты помещают в стакан вместимостью 100 
, расплавляют на водяной бане при температуре (60
2)°С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
, расплавляют на водяной бане при температуре (60 2)°С и перемешивают до получения однородной эмульсии.
6.4.8.1 В стакан вместимостью 100 
помещают (5,000
0,001) г продукта, подготовленного по 6.4.2 - 6.4.6. Добавляют 20 
раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) и аккуратно перемешивают. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 
, ополаскивая стакан раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки.
помещают (5,000 0,001) г продукта, подготовленного по 6.4.2 - 6.4.6. Добавляют 20 раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) и аккуратно перемешивают. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 , ополаскивая стакан раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки.
Затем колбы с раствором помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20
2)°С. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр. В случае получения непрозрачного раствора допускается его центрифугирование при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин.
2)°С. Полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр. В случае получения непрозрачного раствора допускается его центрифугирование при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин.
6.4.8.2 В мерную колбу вместимостью 50 
помещают (5,000
0,001) г масла, пасты масляной, подготовленных по 6.4.7, и добавляют 35 
раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Колбу помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20
2)°С. Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки. Полученную смесь центрифугируют при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин. Для анализа используем водную фракцию.
помещают (5,000 0,001) г масла, пасты масляной, подготовленных по 6.4.7, и добавляют 35 раствора элюента мобильной фазы А (6.1.4.1). Колбу помещают в ультразвуковую баню на 15 мин, охлаждают до температуры (20 2)°С. Объем раствора доводят раствором элюента мобильной фазы А (6.1.4.1) до метки. Полученную смесь центрифугируют при скорости вращения 15000 об/мин в течение 5 мин. Для анализа используем водную фракцию.
В полипропиленовый флакон (виалу) вместимостью 15 
помещают (1,000
0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 
пробы продукта, подготовленной по 6.4.8, добавляют 0,1 
раствора внутреннего стандарта (6.1.6.3). Затем добавляют 3 
ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
помещают (1,000 0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 пробы продукта, подготовленной по 6.4.8, добавляют 0,1 раствора внутреннего стандарта (6.1.6.3). Затем добавляют 3 ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
Полученную водную фракцию переносят в мерную пробирку вместимостью 10 
и упаривают до 1 
на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 
буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
и упаривают до 1 на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
6.6 Подготовка проб для определения левомицетина, стрептомицина и антибиотиков пенициллиновой группы
В полипропиленовый флакон (виалу) вместимостью 15 
помещают (1,000
0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 
пробы продукта, подготовленной по 6.4.8. Затем добавляют 3 
ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
помещают (1,000 0,001) г пробы продукта, подготовленной по 6.4.1, или 10,0 пробы продукта, подготовленной по 6.4.8. Затем добавляют 3 ацетонитрила, закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на встряхивателе в течение 3 мин. Оставляют на 15 мин в горизонтальном положении. Далее виалу с образцом помещают в центрифугу, предварительно охлажденную до температуры 4°С, и центрифугируют при скорости вращения 4000 об/мин в течение 20 мин.
Полученную водную фракцию переносят в мерную пробирку вместимостью 10 
и упаривают до 1 
на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 
буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
и упаривают до 1 на нагревательном модуле в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С. К полученному остатку добавляют 3 - 5 буферного раствора (6.1.3), аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят буферным раствором (6.1.3) до метки и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин.
Для проведения твердофазной экстракции картридж для ТФЭ предварительно кондиционируют 6 
50%-ного раствора метанола и уравновешивают 6 
деионизированной воды. Затем вносят пробу продукта, подготовленную по 6.5 или 6.6, и вновь промывают 6 
деионизированной воды. Антибиотики элюируют с сорбента при помощи 6 
раствора элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2). Полученный элюат упаривают на нагревательном модуле досуха в токе азота под вакуумом при температуре (40
1)°С, затем растворяют раствором элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2) до 0,5 
, после чего используют для хроматографирования.
50%-ного раствора метанола и уравновешивают 6 деионизированной воды. Затем вносят пробу продукта, подготовленную по 6.5 или 6.6, и вновь промывают 6 деионизированной воды. Антибиотики элюируют с сорбента при помощи 6 раствора элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2). Полученный элюат упаривают на нагревательном модуле досуха в токе азота под вакуумом при температуре (40 1)°С, затем растворяют раствором элюента мобильной фазы Б (6.1.4.2) до 0,5 , после чего используют для хроматографирования.
5)°С;
25)%;
10) кПа;
5) Гц;
10) В.
8.1 Хроматографирование градуировочных растворов и анализируемой пробы продукта проводят в идентичных условиях.