5.4.2 Приготовление рабочих растворов

5.4.2.1 Приготовление ацетатного буферного раствора с рН в интервале 3,0-3,1

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ вносят 55 см³ ледяной уксусной кислоты и 28 см³ раствора уксуснокислого натрия концентрации 1 моль/дм³. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Для количественного определения L-лизина кормового кристаллического требуется приготовить 2 дм³ буферного раствора.

5.4.2.2 Приготовление раствора натрия тетраборнокислого (буры) с рН в интервале 9,1-9,2

3,78 г натрия тетраборнокислого взвешивают с точностью до 2-го десятичного знака, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см³, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем раствора до метки.

Для количественного определения L-лизина кормового кристаллического требуется приготовить 3 дм³ этого раствора.

5.4.2.3 Приготовление нингидринового реактива

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят: 0,5 г нингидрина, взвешенного с точностью до одного десятичного знака; 1 см³ уксусной кислоты и 4 см³ дистиллированной воды. Затем доливают до метки ацетоном и перемешивают содержимое колбы до полного растворения нингидрина.

5.4.2.4 Приготовление элюирующего раствора

В мерную колбу вместимостью 500 см³ вносят 200 см³ раствора этанола с массовой долей 75 %, добавляют 0,1 см³ насыщенного раствора азотнокислой или двухлористой меди и 0,8 см³ раствора азотной кислоты с массовой долей 10 %. Элюирующий раствор, содержащий ионы меди, можно заменить элюирующим раствором, содержащим ионы кадмия. В этом случае раствор готовят следующим образом. В колбу вместимостью 500 см³ вносят 2,5 г хлористого кадмия, взвешенного с точностью до одного десятичного знака, и 230 см³ дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного растворения кристаллов кадмия, приливают 250 см³ этилового спирта, раствор в колбе снова перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.

5.4.2.5 Приготовление стандартного раствора L-лизина кормового кристаллического концентрацией 5 г/дм³, С₅

Навеску 0,5000 г хлоргидрата L-лизина кормового кристаллического, предварительно взвешенную при температуре (105   2) °С до постоянной массы в течение 4 ч, взвешивают с точностью до четвертого десятичного знака и помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³.

Колбу доливают раствором изопропанола с массовой долей 10 % до полного растворения L-лизина кормового кристаллического. Концентрация полученного раствора должна составлять 5 г/дм³.

Примечание - Навеска считается высушенной до постоянной массы, если разница между двумя последними взвешиваниями будет не более 1,0000 мг.

5.4.2.6 Приготовление стандартного раствора L-лизина кормового кристаллического концентрацией 2,5 г/дм³, С_2,5

В мерную колбу вместимостью 50 см³ пипеткой отбирают 25 см³ стандартного раствора L-лизина кормового кристаллического с концентрацией 5 г/дм³. Содержимое колбы доводят до метки раствором изопропанола с массовой долей 10 % и тщательно перемешивают. Концентрация полученного раствора составляет 2,5 г/дм³.

Полученные стандартные растворы сохраняют в холодильнике при температуре 4 °С в течение 1 мес.

5.4.3 Подготовка к испытанию

При анализе каждой партии берут одновременно не менее двух параллельных навесок испытуемого образца L-лизина кормового кристаллического. Навеску образца 0,5000 г взвешивают с точностью до 4-го десятичного знака.

Взятые навески без потерь переносят в мерные колбы вместимостью 100 см³, доливают в каждую из них по 80 см³ дистиллированной воды. Колбы закрывают пробками и оставляют на 45 мин при комнатной температуре для растворения L-лизина кормового кристаллического, перемешивая содержимое колб каждые 10 мин. Далее содержимое колб доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают, помещают в центрифужные стаканы и центрифугируют в течение 10-15 мин.

5.4.4 Проведение испытания

Полученный раствор объемом 0,03-0,05 см³ наносят пипеткой или лабораторным дозатором на бумагу для электрофореза. Той же пипеткой или лабораторным дозатором наносят 0,03-0,05 см³ стандартных растворов L-лизина кормового кристаллического (см. примечание).

Для одной навески должно быть нанесено не менее трех точек пробы и не менее двух точек каждого стандартного раствора. Порядок нанесения проб и стандартных растворов следующий:

Примечание - Перед нанесением стандартные растворы L-лизина должны быть выдержаны при комнатной температуре не менее 1 ч.

Электрофорез проводят в ацетатном буфере или в растворе буры в течение 30-90 мин при градиенте напряжения 14-35 г/см, причем плотность тока устанавливается в пределах от 0,2 до 0,9 мА/см.

По окончании электрофореза бумагу высушивают сначала в вытяжном шкафу, а затем в сушильном шкафу при температуре (105   2) °С в течение 10 мин. Далее электрофореграмму опрыскивают нингидриновым реактивом, подсушивают в вытяжном шкафу до появления красных пятен, а затем в сушильном шкафу при температуре 60 °С в течение 20 мин или при температуре 80 °С в течение 10 мин.

Пятна, соответствующие лизину, вырезают и экстрагируют 5 см³ элюирующего раствора в течение 15 мин в темноте. Затем замеряют интенсивность окраски раствора на фотоколориметре при зеленом светофильтре в кювете с толщиной поглощающего свет пути 10 мм против контрольного раствора. Для его получения вырезают с края электрофореграммы участок в два раза больший, чем площадь вырезанного пятна лизина, и экстрагируют 10 см³ элюирующего раствора в течение 15 мин в темноте.

5.4.5 Обработка результатов

Массовую долю лизина Х в пересчете на сухое вещество, %, вычисляют по формуле

где - концентрация стандартного раствора L-лизина, равная 2,5 г/дм³;

- навеска образца, г;

0,1 - объем мерной колбы, дм³;

100 - перевод в проценты;

и - среднеарифметические величины оптических плотностей стандартных растворов концентраций 2,5 и 5,0 г/дм³ соответственно;

- среднеарифметическая величина оптической плотности анализируемого раствора;

W - массовая доля влаги, %.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 10 % относительных.

5.5 Определение массовой доли золы

5.5.1 Аппаратура и материалы:

- печь муфельная с диапазоном нагрева от 50 °С до 1000 °С, обеспечивающая поддержание заданной температуры в пределах  25 °С;

- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ Р 53228;

- стаканчики для взвешивания стеклянные (бюксы) типа СН по ГОСТ 25336; или

- металлические диаметром 45-50 мм и высотой 40-50 мм;

- эксикаторы 1-250 по ГОСТ 25336;

- тигли фарфоровые по ГОСТ 9147 или тигли платиновые;

- кальций хлористый 2-водный по [6], прокаленный; или