Действующий
Примечание - Навеска считается высушенной до постоянной массы, если разница между двумя последними взвешиваниями будет не более 1,0000 мг.
В мерную колбу вместимостью 50 см3 пипеткой отбирают 25 см3 стандартного раствора L-лизина кормового кристаллического с концентрацией 5 г/дм3. Содержимое колбы доводят до метки раствором изопропанола с массовой долей 10 % и тщательно перемешивают. Концентрация полученного раствора составляет 2,5 г/дм3.
При анализе каждой партии берут одновременно не менее двух параллельных навесок испытуемого образца L-лизина кормового кристаллического. Навеску образца 0,5000 г взвешивают с точностью до 4-го десятичного знака.
Взятые навески без потерь переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3, доливают в каждую из них по 80 см3 дистиллированной воды. Колбы закрывают пробками и оставляют на 45 мин при комнатной температуре для растворения L-лизина кормового кристаллического, перемешивая содержимое колб каждые 10 мин. Далее содержимое колб доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают, помещают в центрифужные стаканы и центрифугируют в течение 10-15 мин.
Полученный раствор объемом 0,03-0,05 см3 наносят пипеткой или лабораторным дозатором на бумагу для электрофореза. Той же пипеткой или лабораторным дозатором наносят 0,03-0,05 см3 стандартных растворов L-лизина кормового кристаллического (см. примечание).
Для одной навески должно быть нанесено не менее трех точек пробы и не менее двух точек каждого стандартного раствора. Порядок нанесения проб и стандартных растворов следующий:
Примечание - Перед нанесением стандартные растворы L-лизина должны быть выдержаны при комнатной температуре не менее 1 ч.
Электрофорез проводят в ацетатном буфере или в растворе буры в течение 30-90 мин при градиенте напряжения 14-35 г/см, причем плотность тока устанавливается в пределах от 0,2 до 0,9 мА/см.
По окончании электрофореза бумагу высушивают сначала в вытяжном шкафу, а затем в сушильном шкафу при температуре (105
2) °С в течение 10 мин. Далее электрофореграмму опрыскивают нингидриновым реактивом, подсушивают в вытяжном шкафу до появления красных пятен, а затем в сушильном шкафу при температуре 60 °С в течение 20 мин или при температуре 80 °С в течение 10 мин.
![](https://dokipedia.ru/sites/default/files/doc_files/534/704/1/files/image8.emf.jpg)
Пятна, соответствующие лизину, вырезают и экстрагируют 5 см3 элюирующего раствора в течение 15 мин в темноте. Затем замеряют интенсивность окраски раствора на фотоколориметре при зеленом светофильтре в кювете с толщиной поглощающего свет пути 10 мм против контрольного раствора. Для его получения вырезают с края электрофореграммы участок в два раза больший, чем площадь вырезанного пятна лизина, и экстрагируют 10 см3 элюирующего раствора в течение 15 мин в темноте.
![](https://dokipedia.ru/sites/default/files/doc_files/534/704/1/files/image12.emf.jpg)
![](https://dokipedia.ru/sites/default/files/doc_files/534/704/1/files/image13.emf.jpg)
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 10 % относительных.
- печь муфельная с диапазоном нагрева от 50 °С до 1000 °С, обеспечивающая поддержание заданной температуры в пределах
25 °С;
![](https://dokipedia.ru/sites/default/files/doc_files/534/704/1/files/image15.emf.jpg)
- весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ Р 53228;
Муфельная печь должна быть снабжена терморегулятором и прибором для определения температуры внутри муфельной печи.
Эксикатор в нижней части должен быть заполнен прокаленным хлористым кальцием или концентрированной серной кислотой. Пришлифованные края эксикатора смазывают вазелином или вакуумной смазкой.
Навеску препарата 2,0000-3,0000 г, взвешенную с точностью до 4-го десятичного знака, помещают в предварительно прокаленный до постоянной массы и взвешенный фарфоровый или платиновый тигель, смачивают 0,5-1,0 см3 концентрированной серной кислоты и осторожно нагревают на сетке или песчаной бане до удаления паром серной кислоты. Затем прокаливают при красном калении и температуре 600 °С до постоянной массы в течение 2 ч, избегая сплавления золы и спекания ее со стенками тигля. По окончании прокаливания тигель охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Последующие взвешивания проводят через 30-40 мин после прокаливания тигля до постоянной массы. Постоянная масса тигля считается достигнутой, если разница в массе между двумя прокаливаниями не будет превышать 0,001 г.