Действующий
- калориметр фотоэлектрический лабораторный (фотоэлектрокалориметр) по ГОСТ 8.298 любого типа, обеспечивающий измерения в интервале длин волн 535-545 нм, с погрешностью не более 5 % (по коэффициенту пропускания) или не более 0,01 Д (по оптической плотности);
- рН-метр по ГОСТ Р 8.857 или другой прибор для определения рН в диапазоне от 0 до 14 с погрешностью не более 0,05 рН;
- шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий температуру нагрева от 50 °С до 150 °С, с точностью терморегуляции 2 °С;
- весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228, 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных типов;
- бумага хромографическая марок FN-12, ватман толщиной 3 мм или Ленинградская, марок средняя или медленная;
В мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 55 см3 ледяной уксусной кислоты и 28 см3 раствора уксуснокислого натрия концентрации 1 моль/дм3. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают.
Для количественного определения L-лизина кормового кристаллического требуется приготовить 2 дм3 буферного раствора.
3,78 г натрия тетраборнокислого взвешивают с точностью до 2-го десятичного знака, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем раствора до метки.
Для количественного определения L-лизина кормового кристаллического требуется приготовить 3 дм3 этого раствора.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят: 0,5 г нингидрина, взвешенного с точностью до одного десятичного знака; 1 см3 уксусной кислоты и 4 см3 дистиллированной воды. Затем доливают до метки ацетоном и перемешивают содержимое колбы до полного растворения нингидрина.
В мерную колбу вместимостью 500 см3 вносят 200 см3 раствора этанола с массовой долей 75 %, добавляют 0,1 см3 насыщенного раствора азотнокислой или двухлористой меди и 0,8 см3 раствора азотной кислоты с массовой долей 10 %. Элюирующий раствор, содержащий ионы меди, можно заменить элюирующим раствором, содержащим ионы кадмия. В этом случае раствор готовят следующим образом. В колбу вместимостью 500 см3 вносят 2,5 г хлористого кадмия, взвешенного с точностью до одного десятичного знака, и 230 см3 дистиллированной воды. Перемешивают содержимое колбы до полного растворения кристаллов кадмия, приливают 250 см3 этилового спирта, раствор в колбе снова перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой.
Навеску 0,5000 г хлоргидрата L-лизина кормового кристаллического, предварительно взвешенную при температуре (105 2) °С до постоянной массы в течение 4 ч, взвешивают с точностью до четвертого десятичного знака и помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3.
Колбу доливают раствором изопропанола с массовой долей 10 % до полного растворения L-лизина кормового кристаллического. Концентрация полученного раствора должна составлять 5 г/дм3.
Примечание - Навеска считается высушенной до постоянной массы, если разница между двумя последними взвешиваниями будет не более 1,0000 мг.
В мерную колбу вместимостью 50 см3 пипеткой отбирают 25 см3 стандартного раствора L-лизина кормового кристаллического с концентрацией 5 г/дм3. Содержимое колбы доводят до метки раствором изопропанола с массовой долей 10 % и тщательно перемешивают. Концентрация полученного раствора составляет 2,5 г/дм3.
При анализе каждой партии берут одновременно не менее двух параллельных навесок испытуемого образца L-лизина кормового кристаллического. Навеску образца 0,5000 г взвешивают с точностью до 4-го десятичного знака.
Взятые навески без потерь переносят в мерные колбы вместимостью 100 см3, доливают в каждую из них по 80 см3 дистиллированной воды. Колбы закрывают пробками и оставляют на 45 мин при комнатной температуре для растворения L-лизина кормового кристаллического, перемешивая содержимое колб каждые 10 мин. Далее содержимое колб доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают, помещают в центрифужные стаканы и центрифугируют в течение 10-15 мин.
Полученный раствор объемом 0,03-0,05 см3 наносят пипеткой или лабораторным дозатором на бумагу для электрофореза. Той же пипеткой или лабораторным дозатором наносят 0,03-0,05 см3 стандартных растворов L-лизина кормового кристаллического (см. примечание).
Для одной навески должно быть нанесено не менее трех точек пробы и не менее двух точек каждого стандартного раствора. Порядок нанесения проб и стандартных растворов следующий:
Примечание - Перед нанесением стандартные растворы L-лизина должны быть выдержаны при комнатной температуре не менее 1 ч.
Электрофорез проводят в ацетатном буфере или в растворе буры в течение 30-90 мин при градиенте напряжения 14-35 г/см, причем плотность тока устанавливается в пределах от 0,2 до 0,9 мА/см.
По окончании электрофореза бумагу высушивают сначала в вытяжном шкафу, а затем в сушильном шкафу при температуре (105 2) °С в течение 10 мин. Далее электрофореграмму опрыскивают нингидриновым реактивом, подсушивают в вытяжном шкафу до появления красных пятен, а затем в сушильном шкафу при температуре 60 °С в течение 20 мин или при температуре 80 °С в течение 10 мин.