6.2.11 Приготовление реактивов для окраски по Граму

6.2.11.1 Приготовление насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового

10 г кристаллического фиолетового растворяют в 100  этилового спирта.

6.2.11.2 Приготовление водно-спиртового раствора кристаллического фиолетового

1  насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового по 6.2.11.1 растворяют в 10  дистиллированной воды.

6.2.11.3 Приготовление раствора Люголя

2 г йодистого калия растворяют в 5 - 10  дистиллированной воды, затем прибавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его растворения. Затем приливают остальное количество дистиллированной воды. Для приготовления раствора используют 300  дистиллированной воды.

6.2.11.4 Приготовление карболового раствора фуксина Циля

1 г основного кристаллического фуксина растирают в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 96% этиловый спирт в количестве 10  . После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании 100  дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в течение 30 сут.

6.2.11.5 Приготовление водно-спиртового раствора фуксина (раствора Пфейфера)

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

6.2.12 Приготовление реактивов для окраски по Граму (модификация Г.П. Калины)

6.2.12.1 Приготовление реактива 1

В мерную колбу вместимостью 100  помещают (0,50 0,01) г кристаллического фиолетового, добавляют небольшое количество этилового спирта и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят этиловым спиртом до метки.

6.2.12.2 Приготовление реактива 2

К 96  спиртового раствора йодистого калия массовой концентрацией 5 добавляют 2  спиртового раствора основного фуксина массовой концентрацией 50 и 2  спиртового раствора йода массовой концентрацией 50 . Приготовление спиртового раствора йодистого калия проводят на водяной бане при температуре (45 5)°С при постоянном помешивании.

6.2.12.3 Допускается для окраски по Граму использование коммерческих наборов.

6.2.13 Приготовление раствора метиленового голубого для окраски препаратов

6.2.13.1 Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого

В коническую колбу вместимостью 150  помещают (10,00 0,01) г метиленового голубого, приливают 100  96%-ного этилового спирта, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Раствор ставят в термостат при температуре (37 1)°С на 24 ч, затем фильтруют через сухой складчатый фильтр в термостате при той же температуре.

Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37 1)°С - не более 3 мес.

6.2.13.2 Приготовление рабочего раствора метиленового голубого для окраски препаратов

К 30  основного спиртового раствора метиленового голубого, приготовленного по 6.2.13.1, добавляют 100  дистиллированной воды и 1  раствора гидроокиси калия массовой концентрацией 10 .

6.2.14 Приготовление растворов резазурино-натриевой соли

6.2.14.1 Приготовление основного раствора резазурино-натриевой соли

Основной раствор резазурино-натриевой соли готовят следующим образом: (0,100 0,001) г резазурино-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200  и растворяют в небольшом количестве прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной воды. Объем раствора доводят до метки прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора резазурино-натриевой соли при температуре от 4°С до 10°С не более 30 сут.

6.2.14.2 Приготовление рабочего раствора резазурино-натриевой соли

Рабочий раствор резазурино-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например смешивают 10  основного раствора и 25  дистиллированной воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе составляет 0,014%.

Срок хранения рабочего раствора резазурина при температуре (4 2)°С - не более 3 сут.

Основной и рабочий растворы хранят в темных склянках, в защищенном от света месте.

6.2.15 Приготовление раствора контрольного образца сычужного фермента (КО СФ)

1 г контрольного образца сычужного фермента с активностью 100 тыс. ед. растворяют в 100  дистиллированной воды при температуре (30 1)°С, перемешивают и выдерживают до проведения анализа не менее 15 мин.

Срок хранения раствора при температуре от 4°С до 10°С - не более 2 сут

6.2.16 Определение активной кислотности (рН) среды

Определение активной кислотности (рН) питательных сред проводят потенциометрическим методом для контроля рН по прилагаемым инструкциям к соответствующим приборам.

Ориентировочное определение активной кислотности (рН) питательных сред допускается проводить с помощью индикаторных бумажек или готового универсального индикатора.

Требуемую величину активной кислотности (рН) питательной среды устанавливают в ее небольшом объеме, добавляя к ней по каплям 20%-ный раствор гидроокиси натрия или 20%-ный раствор молочной кислоты. Вычисляют, какой объем раствора следует прибавить ко всему объему среды для достижения требуемой величины рН. После прибавления раствора и тщательного перемешивания снова проверяют реакцию среды.

6.3 Подготовка проб к анализу

Отбор проб проводят в асептических условиях в стерильные посуду или пакеты. Отобранные пробы перед испытанием тщательно перемешивают или гомогенизируют при помощи перемешивающего устройства (гомогенизатора).

6.3.1 Молоко, сливки

Отобранные пробы перед испытанием тщательно перемешивают.

6.3.2 Кисломолочные и сквашенные продукты, сметана, закваски

Отобранные пробы перед анализом перемешивают и нейтрализуют.

Для этого в стерильную колбу вместимостью 50  стерильно отбирают (10,0 0,1) исследуемого продукта или закваски и добавляют 1  стерильного раствора двууглекислого натрия, приготовленного по 6.2.10, содержимое перемешивают.

6.3.3 Творог, творожные продукты, сыр и сырные продукты, плавленый сыр и плавленые сырные продукты, альбуминные и сырные пасты

(10,0 0,1) г продукта взвешивают на стерильном часовом стекле, чашке Петри или в бюксе и переносят в стерильную или профламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, тщательно растирают.

6.3.4 Сгущенные продукты

Отобранные пробы перед анализом перемешивают стерильной ложкой. Взвешивают стерильную сухую колбу, в которую помещают (10,0 0,1) г продукта.

6.3.5 Сухие продукты