6.2.4.2 Приготовление твердой питательной среды АЖФК (агар желчный фиолетово-красный)

Необходимое количество сухой среды, регламентируемое инструкцией производителя, вносят в 1 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, затем нагревают и кипятят при помешивании 5 мин. Среду готовят непосредственно перед посевом.

Готовая среда должна иметь фиолетово-красный цвет.

Допускается хранение в течение 7 сут при температуре (4 2)°С приготовленной и разлитой в пробирки среды, прокипяченной на водяной бане или пастеризованной текучим паром в автоклаве (30,0 0,5) мин.

6.2.4.3 Приготовление среды Эндо

Необходимое количество сухой среды, регламентируемое инструкцией производителя, вносят в 1 дистиллированной воды, тщательно размешивают, затем нагревают и кипятят в течение 3 - 5 мин, не допуская пригорания. Среду готовят непосредственно перед посевом.

6.2.5 Приготовление раствора хлористого натрия

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают (8,50 0,01) г хлористого натрия. Добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.6 Приготовление концентрированного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000  наливают 500  дистиллированной воды, добавляют (34,00 0,01) г однозамещенного фосфорнокислого калия и тщательно перемешивают. Контролируют значение активной кислотности раствора и устанавливают требуемое значение, равное 7,2 ед. рН, раствором гидроокиси натрия массовой долей 20%. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

Стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.7 Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают 1,25  концентрированного раствора фосфатного буфера, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  , стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин и используют для приготовления разведений.

6.2.8 Приготовление раствора двузамещенного фосфорнокислого калия для приготовления разведений казеина и пищевых казеинатов

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают (20,00 0,01) г двузамещенного фосфорнокислого калия, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Устанавливают активную кислотность 8,4 ед. рН (для приготовления разведений 1:10) и 7,4 ед. рН (для приготовления всех последующих разведений). В качестве кислой среды рекомендуется применять раствор молочной кислоты объемной долей 20%, в качестве щелочной - раствор гидроокиси натрия молярной концентрации 0,1 . Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.9 Приготовление раствора лимоннокислого натрия для разведений сыра

(20,00 0,01) г трехзамещенного лимоннокислого натрия растворяют в 1 дистиллированной воды, разливают в пробирки по 10  или в колбы по 93  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.10 Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски

В мерную колбу вместимостью 100  помещают (10,00 0,01) г двууглекислого натрия, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10 - 20  в пробирки и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.11 Приготовление реактивов для окраски по Граму

6.2.11.1 Приготовление насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового

10 г кристаллического фиолетового растворяют в 100  этилового спирта.

6.2.11.2 Приготовление водно-спиртового раствора кристаллического фиолетового

1  насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового по 6.2.11.1 растворяют в 10  дистиллированной воды.

6.2.11.3 Приготовление раствора Люголя

2 г йодистого калия растворяют в 5 - 10  дистиллированной воды, затем прибавляют 1 г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его растворения. Затем приливают остальное количество дистиллированной воды. Для приготовления раствора используют 300  дистиллированной воды.

6.2.11.4 Приготовление карболового раствора фуксина Циля

1 г основного кристаллического фуксина растирают в фарфоровой ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 96% этиловый спирт в количестве 10  . После того как краситель хорошо разотрется, приливают при постоянном помешивании 100  дистиллированной воды. Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин Циля хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой в течение 30 сут.

6.2.11.5 Приготовление водно-спиртового раствора фуксина (раствора Пфейфера)

К 1 части карболового фуксина Циля приливают 9 частей дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед использованием.

6.2.12 Приготовление реактивов для окраски по Граму (модификация Г.П. Калины)

6.2.12.1 Приготовление реактива 1

В мерную колбу вместимостью 100  помещают (0,50 0,01) г кристаллического фиолетового, добавляют небольшое количество этилового спирта и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят этиловым спиртом до метки.

6.2.12.2 Приготовление реактива 2

К 96  спиртового раствора йодистого калия массовой концентрацией 5 добавляют 2  спиртового раствора основного фуксина массовой концентрацией 50 и 2  спиртового раствора йода массовой концентрацией 50 . Приготовление спиртового раствора йодистого калия проводят на водяной бане при температуре (45 5)°С при постоянном помешивании.

6.2.12.3 Допускается для окраски по Граму использование коммерческих наборов.

6.2.13 Приготовление раствора метиленового голубого для окраски препаратов

6.2.13.1 Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого

В коническую колбу вместимостью 150  помещают (10,00 0,01) г метиленового голубого, приливают 100  96%-ного этилового спирта, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Раствор ставят в термостат при температуре (37 1)°С на 24 ч, затем фильтруют через сухой складчатый фильтр в термостате при той же температуре.

Срок хранения основного раствора метиленового голубого в термостате при температуре (37 1)°С - не более 3 мес.

6.2.13.2 Приготовление рабочего раствора метиленового голубого для окраски препаратов

К 30  основного спиртового раствора метиленового голубого, приготовленного по 6.2.13.1, добавляют 100  дистиллированной воды и 1  раствора гидроокиси калия массовой концентрацией 10 .

6.2.14 Приготовление растворов резазурино-натриевой соли

6.2.14.1 Приготовление основного раствора резазурино-натриевой соли

Основной раствор резазурино-натриевой соли готовят следующим образом: (0,100 0,001) г резазурино-натриевой соли переносят в мерную колбу вместимостью 200  и растворяют в небольшом количестве прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной воды. Объем раствора доводят до метки прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной водой. Смесь тщательно перемешивают.

Срок хранения основного раствора резазурино-натриевой соли при температуре от 4°С до 10°С не более 30 сут.

6.2.14.2 Приготовление рабочего раствора резазурино-натриевой соли

Рабочий раствор резазурино-натриевой соли готовят разбавлением основного раствора прокипяченной и охлажденной до температуры (25 2)°С дистиллированной водой в соотношении 1:2,5 (например смешивают 10  основного раствора и 25  дистиллированной воды). Массовая доля резазурина в рабочем растворе составляет 0,014%.

Срок хранения рабочего раствора резазурина при температуре (4 2)°С - не более 3 сут.

Основной и рабочий растворы хранят в темных склянках, в защищенном от света месте.