Действующий
Метод заключается в высеве определенного количества продукта в агаризованную среду, культивировании посевов при (30 0,5) °С в течение 48 ч и подсчете колоний колиформных бактерий.
- весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228, 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных типов;
- рН-метр по ГОСТ Р 8.857 или другой прибор для определения рН среды в интервале 1 14 с погрешностью не более 0,1 ед. рН;
8,50 г хлористого натрия и 1,00 г пептона растворяют в воде при медленном нагревании. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7,0 0,1), разливают в конические колбы и пробирки, стерилизуют при температуре (121 1) °С в течение 30 мин.
Компоненты, кроме кристаллического фиолетового, взвешивают с точностью до 2-го десятичного знака, кристаллический фиолетовый взвешивают с точностью до 3-го десятичного знака.
Все компоненты растворяют в воде, дают постоять несколько минут, хорошо перемешивают, устанавливают рН таким образом, чтобы после кипячения он составлял (7,4 0,1) при температуре 25 °С, доводят до кипения, периодически перемешивая, кипятят в течение 2 мин и немедленно охлаждают до температуры (45 0,5) °С в водяной бане. Необходимо исключить перегрев среды и повторный ее нагрев. Среду не стерилизуют в автоклаве и используют в течение 3 ч с момента изготовления.
Разведение для посевов готовят следующим образом: к 1,00 г препарата, взвешенному с точностью до 2-го десятичного знака, добавляют 9 см3 пептонно-солевого раствора (рН = 7,0) и тщательно перемешивают с жидкостью до получения однородной суспензии.
Из первого разведения 10-1 готовят последующие разведения 10-2 и т.д. Порядок разведения выбирают в зависимости от предполагаемой обсемененности продукта, чтобы на чашках развивалось не более 150 колоний (если на чашке вырастает более 150 колоний, колонии колиформных бактерий могут иметь нетипичную морфологию).
Посев производят из одного-двух последовательных 10-кратных разведений. Из каждого разведения делают высев на две-три чашки Петри. По 1 см3 суспензии вносят в чашки с заранее маркированным дном. Не позднее чем через 15 мин после внесения посевного материала в чашки Петри его заливают 12 см3 расплавленной и охлажденной до температуры (45 0,5) °С агаризованной лактозной среды. Сразу после заливки среды содержимое чашки тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. Затем чашки Петри с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды. После полного застывания около 4 см3 агаризованной лактозной среды, расплавленной и охлажденной до температуры (45 0,5) °С, дополнительно вносят на поверхность чашки с посевным материалом, перемешивают и дают застыть.
После застывания питательной среды чашки переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при температуре (30 1) °С в течение 24 ч.
Учитывают характерные для колиформных бактерий колонии на чашках, в которых выросло всего не более 150 колоний. Через 24 ч после инкубации при температуре 30 °С колиформные бактерии образуют темно-красные колонии диаметром 0,5 мм и более.