8,50 г хлористого натрия и 1,00 г пептона растворяют в воде при медленном нагревании. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7,0   0,1), разливают в конические колбы и пробирки, стерилизуют при температуре (121   1) °С в течение 30 мин.

Раствор хранят в темном месте при температуре от 0 °С до 5 °С не более 30 сут.

Агар лактозный с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным и желчью. Состав среды:

пептон ... 7,00 г;

дрожжевой экстракт ... 3,00 г;

лактоза (безводная) ... 10,00 г;

хлорид натрия ... 5,00 г;

желчные соли ... 1,50 г;

нейтральный красный ... 0,03 г;

кристаллический фиолетовый ... 0,002 г;

агар ... 9-16 г;

вода дистиллированная ... 1000 см³.

Компоненты, кроме кристаллического фиолетового, взвешивают с точностью до 2-го десятичного знака, кристаллический фиолетовый взвешивают с точностью до 3-го десятичного знака.

Приготовление среды.

Все компоненты растворяют в воде, дают постоять несколько минут, хорошо перемешивают, устанавливают рН таким образом, чтобы после кипячения он составлял (7,4   0,1) при температуре 25 °С, доводят до кипения, периодически перемешивая, кипятят в течение 2 мин и немедленно охлаждают до температуры (45   0,5) °С в водяной бане. Необходимо исключить перегрев среды и повторный ее нагрев. Среду не стерилизуют в автоклаве и используют в течение 3 ч с момента изготовления.

6.8.4 Проведение испытания

Разведение для посевов готовят следующим образом: к 1,00 г препарата, взвешенному с точностью до 2-го десятичного знака, добавляют 9 см³ пептонно-солевого раствора (рН = 7,0) и тщательно перемешивают с жидкостью до получения однородной суспензии.

Из первого разведения 10^-1 готовят последующие разведения 10^-2 и т.д. Порядок разведения выбирают в зависимости от предполагаемой обсемененности продукта, чтобы на чашках развивалось не более 150 колоний (если на чашке вырастает более 150 колоний, колонии колиформных бактерий могут иметь нетипичную морфологию).

Посев производят из одного-двух последовательных 10-кратных разведений. Из каждого разведения делают высев на две-три чашки Петри. По 1 см³ суспензии вносят в чашки с заранее маркированным дном. Не позднее чем через 15 мин после внесения посевного материала в чашки Петри его заливают 12 см³ расплавленной и охлажденной до температуры (45   0,5) °С агаризованной лактозной среды. Сразу после заливки среды содержимое чашки тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. Затем чашки Петри с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды. После полного застывания около 4 см³ агаризованной лактозной среды, расплавленной и охлажденной до температуры (45   0,5) °С, дополнительно вносят на поверхность чашки с посевным материалом, перемешивают и дают застыть.

Для проверки стерильности в контрольную чашку вносят 12 см³ агаризованной среды.

После застывания питательной среды чашки переворачивают крышками вниз и инкубируют в термостате при температуре (30   1) °С в течение 24 ч.

6.8.5 Обработка результатов

Учитывают характерные для колиформных бактерий колонии на чашках, в которых выросло всего не более 150 колоний. Через 24 ч после инкубации при температуре 30 °С колиформные бактерии образуют темно-красные колонии диаметром 0,5 мм и более.

Для подсчета отбирают чашки с посевом из тех разведений, где выросло 15-150 типичных колоний колиформных бактерий. Результаты обрабатывают и пересчитывают на 0,10 г препарата.

6.9 Определение безвредности

6.9.1 Аппаратура и реактивы:

- шприц медицинский инъекционный по ГОСТ 22967;

- ступка фарфоровая по ГОСТ 9147;

- вода питьевая по ГОСТ Р 51232.

6.9.2 Проведение испытания

Для проведения испытания отбирают пять цыплят 30-дневного возраста массой около 300 г или пять белых мышей массой по 14-16 г.

Кормобактерин тщательно растирают в ступке с водой. Воду добавляют с таким расчетом, чтобы 1 см³ готовой суспензии содержал 200 мг кормобактерина.

Суспензию вводят цыплятам шприцем с тонким резиновым зондом через рот в течение 5 сут однократно в дозе 3 см³ на каждого (из расчета 1 см³ на 100 г живой массы).

Мышам суспензию вводят через рот с помощью иглы, на конец которой наплавлена олива диаметром не более 1 мм. Препарат вводят ежедневно в течение 5 сут однократно в дозе 0,5 см³ на каждую мышь (из расчета 100 мг препарата на одну мышь).

Допускается определение безвредности путем естественного скармливания кормобактерина мышам массой 16-18 г.

Препарат массой 1,00 г, взвешенный с точностью до 2-го десятичного знака, смешивают с водой в соотношении 1:10 (из расчета 200 мг на мышь). Пять мышей помещают в отдельные клетки, в которые ставят раствор препарата, налитый в чашку Петри, на 1 сут. На время исследования другого питья не дают. Мыши получают препарат в течение 5 сут.

6.9.3 Обработка результатов

Кормобактерин считают безвредным, если все цыплята остаются живыми в течение 5 сут, мыши в течение двух-трех последующих суток наблюдения. При гибели хотя бы одного цыпленка или мыши в повторном опыте препарат бракуют.

Каждого цыпленка или мышь используют в опыте один раз.

7 Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение

7.1 Упаковка и маркировка

Упаковку и маркировку кормобактерина проводят в соответствии с ГОСТ Р 57234 и ГОСТ Р 57249, кроме мешков марки НМ.

7.1.1 Допускается упаковка кормобактерина в мешки марки НМ только для потребителей областей Центральной России.

Упаковка в мягкие специализированные контейнеры разового использования для сыпучих продуктов по НТД с вкладышем из пленки полиэтиленовой - по ГОСТ 10354 (с 01.01.94 г.).

Допускается упаковка препарата в мешки или вкладыши из полиплена по [9].

Препарат фасуют по 10, 15, 20 кг. Погрешность взвешивания единицы упаковки не более  1,25 %.

7.1.2 Маркировка кормобактерина - по ГОСТ Р 57249 с нанесением манипуляционного знака "Боится сырости".

7.2 Транспортирование и хранение

Транспортирование и хранение препарата - по ГОСТ Р 57234 и ГОСТ Р 57249.

Каждую партию отделяют одну от другой.