Культуры, дающие положительную реакцию агглютинации с поливалентной сывороткой, также проверяют с монорецепторными агглютинирующими сыворотками.

Сначала с помощью монорецепторных 0-сывороток устанавливают принадлежность культур к той или иной серологической группе.

Установив серологическую группу, к которой отнесена данная культура, последнюю проверяют в реакции агглютинации с Н-сыворотками I и II фазы.

На основании положительной реакции агглютинации с определенными 0- и Н-сыворотками анализируемую культуру относят к одному из серотипов.

6.7.5 Обработка результатов

Обнаружение подвижных (кроме S. gallinarum, S. pullorum) грамотрицательных бактерий, не разлагающих лактозу и сахарозу, разлагающих глюкозу и маннит, выделяющих сероводород, не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с поливалентной и монорецепторными 0- и Н-сальмонеллезными сыворотками, указывает на присутствие в исследуемой пробе бактерий из рода сальмонелл.

6.8 Метод определения количества колиформных бактерий

6.8.1 Сущность метода

Метод заключается в высеве определенного количества продукта в агаризованную среду, культивировании посевов при (30   0,5) °С в течение 48 ч и подсчете колоний колиформных бактерий.

6.8.2 Аппаратура, материалы и реактивы:

- весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228, 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных типов;

- термостат любого типа, обеспечивающий температуру нагрева (30   1) °С;

- прибор для подсчета колоний по действующей НТД по [5];

- рН-метр по ГОСТ Р 8.857 или другой прибор для определения рН среды в интервале 1   14 с погрешностью не более 0,1 ед. рН;

- баня водяная с пределом терморегуляции от 20 °С до 100 °С и точностью терморегуляции  3 °С;

- чашки ЧБН 2 по ГОСТ 25336;

- пробирки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336, вместимостью 10 см³;

- пептонно-солевой раствор рН = 7,0;

- колбы по ГОСТ 25336 типа Кн, вместимостью 2000 см³;

- пипетки 1,4-2-1, 10 по ГОСТ 29227;

- агар лактозный с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным и желчью;

- стаканчик для взвешивания пробирки;

- шпатель для взятия навески;

- фильтровальная бумага по ГОСТ 12026.

6.8.3 Подготовка к испытанию

6.8.3.1 Состав и приготовление питательных сред

Пептонно-солевой раствор. Состав среды:

натрий хлористый ... 8,50 г;

пептон для бактериологических целей ... 1,00 г;

вода дистиллированная ... 1000 см³.

Приготовление среды

8,50 г хлористого натрия и 1,00 г пептона растворяют в воде при медленном нагревании. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7,0   0,1), разливают в конические колбы и пробирки, стерилизуют при температуре (121   1) °С в течение 30 мин.

Раствор хранят в темном месте при температуре от 0 °С до 5 °С не более 30 сут.

Агар лактозный с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным и желчью. Состав среды:

пептон ... 7,00 г;

дрожжевой экстракт ... 3,00 г;

лактоза (безводная) ... 10,00 г;

хлорид натрия ... 5,00 г;

желчные соли ... 1,50 г;

нейтральный красный ... 0,03 г;

кристаллический фиолетовый ... 0,002 г;

агар ... 9-16 г;

вода дистиллированная ... 1000 см³.

Компоненты, кроме кристаллического фиолетового, взвешивают с точностью до 2-го десятичного знака, кристаллический фиолетовый взвешивают с точностью до 3-го десятичного знака.

Приготовление среды.

Все компоненты растворяют в воде, дают постоять несколько минут, хорошо перемешивают, устанавливают рН таким образом, чтобы после кипячения он составлял (7,4   0,1) при температуре 25 °С, доводят до кипения, периодически перемешивая, кипятят в течение 2 мин и немедленно охлаждают до температуры (45   0,5) °С в водяной бане. Необходимо исключить перегрев среды и повторный ее нагрев. Среду не стерилизуют в автоклаве и используют в течение 3 ч с момента изготовления.

6.8.4 Проведение испытания

Разведение для посевов готовят следующим образом: к 1,00 г препарата, взвешенному с точностью до 2-го десятичного знака, добавляют 9 см³ пептонно-солевого раствора (рН = 7,0) и тщательно перемешивают с жидкостью до получения однородной суспензии.

Из первого разведения 10^-1 готовят последующие разведения 10^-2 и т.д. Порядок разведения выбирают в зависимости от предполагаемой обсемененности продукта, чтобы на чашках развивалось не более 150 колоний (если на чашке вырастает более 150 колоний, колонии колиформных бактерий могут иметь нетипичную морфологию).

Посев производят из одного-двух последовательных 10-кратных разведений. Из каждого разведения делают высев на две-три чашки Петри. По 1 см³ суспензии вносят в чашки с заранее маркированным дном. Не позднее чем через 15 мин после внесения посевного материала в чашки Петри его заливают 12 см³ расплавленной и охлажденной до температуры (45   0,5) °С агаризованной лактозной среды. Сразу после заливки среды содержимое чашки тщательно перемешивают путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. Затем чашки Петри с посевами оставляют на горизонтальной поверхности до полного застывания питательной среды. После полного застывания около 4 см³ агаризованной лактозной среды, расплавленной и охлажденной до температуры (45   0,5) °С, дополнительно вносят на поверхность чашки с посевным материалом, перемешивают и дают застыть.