После выдерживания в течение 18-24 ч делают посев из каждой колбы на чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами бактоагаром Плоскирева, висмут-сульфитным агаром, со средой Эндо или Левина (по две чашки).

Перед посевом содержимое колб тщательно перемешивают и делают посев штрихом диаметром 2,5-3,0 мм на чашки.

Посевы помещают в термостат на 18-24 ч при температуре (37   0,2) °С, посевы на висмут-сульфитном агаре - на 48 ч.

На селективных средах сальмонеллы растут, образуя характерные колонии: на среде Плоскирева - в виде бесцветных или нежно-розовых колоний, но более плотных и несколько меньшего размера, чем на среде Эндо; на среде Левина - в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колонии.

На висмут-сульфитном агаре Salmonella typhi, Salmonella paratyphi А растут в виде мелких, нежных, серовато-зеленых колоний с черным центром.

S. cholerae suis - в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные ореолом, цвет среды под колонией - черный.

Если рост колоний выражен слабо или не наблюдается типичных колоний сальмонелл, чашки повторно выдерживают в термостате при температуре (37   0,2) °С в течение 20-24 ч. Затем снова определяют наличие типичных колоний сальмонелл.

6.7.4.4 Подтверждение присутствия Salmonella

При обнаружении на чашках подозрительных колоний исследуют 3-5 колоний в каждой чашке.

Колонии высевают на комбинированную среду Расселя или двухсахарный (лактоза, глюкоза) агар, предпочтительнее на трехсахарный (лактоза, глюкоза, сахароза) "скошенный столбик" с мочевиной.

Высев колоний также делают на короткий пестрый ряд, включающий скошенный агар и среды Гисса с лактозой, глюкозой и сахарозой, а также на бульон Хоттингера для определения индола и сероводорода.

Культуры, ферментирующие лактозу, глюкозу и сахарозу с образованием газа и расщепляющие мочевину, отбрасывают. Культуры, не ферментирующие лактозу и сахарозу и не расщепляющие мочевину, подлежат дальнейшему исследованию.

Изучают морфологию культуры в мазке, окрашенном по Граму, и подвижность (в висячей или раздавленной капле или в полужидком агаре).

Культуры, представляющие собой грамотрицательные палочки, ферментирующие глюкозу с образованием газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, не расщепляющие мочевину и не образующие индол, подвергают серологическому исследованию в реакции агглютинации или на предметном стекле с набором агглютинирующих сывороток.

Серологические подтверждения

Поливалентную агглютинирующую сыворотку применяют для дифференцирования культур рода сальмонелла от других возбудителей кишечных инфекций, а монорецепторные 0- и Н-сыворотки - для идентификации сальмонеллезных культур.

Предварительно культуры испытывают в реакции агглютинации на предметном стекле с поливалентной сывороткой.

Отрицательная реакция с поливалентной сывороткой означает, что испытуемая культура не принадлежит к роду Salmonella, и последующий анализ с 0- и Н-агглютинирующими сыворотками не проводят.

Культуры, дающие положительную реакцию агглютинации с поливалентной сывороткой, также проверяют с монорецепторными агглютинирующими сыворотками.

Сначала с помощью монорецепторных 0-сывороток устанавливают принадлежность культур к той или иной серологической группе.

Установив серологическую группу, к которой отнесена данная культура, последнюю проверяют в реакции агглютинации с Н-сыворотками I и II фазы.

На основании положительной реакции агглютинации с определенными 0- и Н-сыворотками анализируемую культуру относят к одному из серотипов.

6.7.5 Обработка результатов

Обнаружение подвижных (кроме S. gallinarum, S. pullorum) грамотрицательных бактерий, не разлагающих лактозу и сахарозу, разлагающих глюкозу и маннит, выделяющих сероводород, не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с поливалентной и монорецепторными 0- и Н-сальмонеллезными сыворотками, указывает на присутствие в исследуемой пробе бактерий из рода сальмонелл.

6.8 Метод определения количества колиформных бактерий

6.8.1 Сущность метода

Метод заключается в высеве определенного количества продукта в агаризованную среду, культивировании посевов при (30   0,5) °С в течение 48 ч и подсчете колоний колиформных бактерий.

6.8.2 Аппаратура, материалы и реактивы:

- весы лабораторные общего назначения по ГОСТ Р 53228, 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г или других аналогичных типов;

- термостат любого типа, обеспечивающий температуру нагрева (30   1) °С;

- прибор для подсчета колоний по действующей НТД по [5];

- рН-метр по ГОСТ Р 8.857 или другой прибор для определения рН среды в интервале 1   14 с погрешностью не более 0,1 ед. рН;

- баня водяная с пределом терморегуляции от 20 °С до 100 °С и точностью терморегуляции  3 °С;

- чашки ЧБН 2 по ГОСТ 25336;

- пробирки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336, вместимостью 10 см³;

- пептонно-солевой раствор рН = 7,0;

- колбы по ГОСТ 25336 типа Кн, вместимостью 2000 см³;

- пипетки 1,4-2-1, 10 по ГОСТ 29227;

- агар лактозный с кристаллическим фиолетовым, нейтральным красным и желчью;

- стаканчик для взвешивания пробирки;

- шпатель для взятия навески;

- фильтровальная бумага по ГОСТ 12026.

6.8.3 Подготовка к испытанию

6.8.3.1 Состав и приготовление питательных сред

Пептонно-солевой раствор. Состав среды:

натрий хлористый ... 8,50 г;

пептон для бактериологических целей ... 1,00 г;

вода дистиллированная ... 1000 см³.

Приготовление среды

8,50 г хлористого натрия и 1,00 г пептона растворяют в воде при медленном нагревании. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН (7,0   0,1), разливают в конические колбы и пробирки, стерилизуют при температуре (121   1) °С в течение 30 мин.