Продолжительность доставки проб при проведении анализов третьей стороной - не более 24 ч при условиях, исключающих потерю влаги и изменение температуры.

Продолжительность доставки проб сырого молока при проведении анализов третьей стороной - не более 4 ч при условиях, исключающих изменение температуры.

Пробы замороженных продуктов хранят и транспортируют при минусовых температурах в соответствии с условиями хранения конкретного продукта, для мороженого - не выше минус 3°С.

6 Порядок подготовки к проведению анализов

6.1 Подготовка посуды и материалов

6.1.1 Всю новую посуду, предназначенную для бактериологических работ, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной долей 1% - 2%) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой.

Посуда с питательными средами после подсчета на них БГКП, дрожжей, плесневых грибов обеззараживается перед мойкой путем стерилизации в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение (90 1) мин или кипячением в течение 1 ч; для споровых микроорганизмов - при (132 2)°С в течение (90 1) мин.

6.1.2 Вымытую и высушенную посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре (175 5)°С в течение 1 ч, или при температуре (160 5)°С в течение 2 ч, или в автоклаве при температуре (121 1)°С в течение (30 1) мин с последующим подсушиванием.

Чашки Петри, пипетки и т.п. стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в автоклаве завернутыми в бумагу.

При отсутствии оборудования для стерилизации при проведении пробы на редуктазу, на сычужно-бродильную и сычужную пробы допускается использовать посуду и резиновые пробки, прокипяченные в дистиллированной воде непосредственно перед испытанием не менее (30 1) мин.

Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками.

Срок хранения стерильной посуды - не более 30 сут.

6.2 Приготовление питательных сред и реактивов

6.2.1 Для приготовления растворов питательных сред используют дистиллированную воду или подготовленную по 6.2.2 питьевую воду.

Для приготовления растворов реактивов используют дистиллированную воду.

6.2.2 Подготовка питьевой воды

Питьевую воду кипятят в открытом сосуде 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и выдерживают на свету в течение 24 ч для разложения соединений хлора. Активная кислотность подготовленной питьевой воды (далее - воды) должна составлять от 6,8 до 7,4 ед рН.

6.2.3 Приготовление питательной среды для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (среда КМАФАнМ)

В колбу достаточной вместимости помещают необходимое количество сухой питательной среды для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, регламентируемое инструкцией производителя, добавляют 1000  воды и тщательно перемешивают. Допускается использование дистиллированной воды.

Смесь нагревают до полного растворения среды. При наличии осадка фильтруют и устанавливают значение рН (7,0 0,2) ед. рН. Среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.4 Питательные среды для определения и идентификации БГКП

6.2.4.1 Приготовление жидкой питательной среды Кесслер

В колбу достаточной вместимости помещают необходимое количество сухой питательной среды Кесслер, регламентируемое инструкцией производителя, добавляют небольшое количество воды и перемешивают. Объем раствора доводят водой до 1000  . Допускается использование дистиллированной воды.

Смесь кипятят, постоянно перемешивая, до полного растворения. При наличии нерастворимого при кипячении осадка среду фильтруют и устанавливают значение активной кислотности (7,4 0,4) ед. рН.. Среду разливают в пробирки с поплавками по 5  или колбы с поплавками по 40 - 50  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (11 1) мин.

Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый или темно-синий цвет и поплавки должны быть полностью заполнены средой.

6.2.4.2 Приготовление твердой питательной среды АЖФК (агар желчный фиолетово-красный)

Необходимое количество сухой среды, регламентируемое инструкцией производителя, вносят в 1 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, затем нагревают и кипятят при помешивании 5 мин. Среду готовят непосредственно перед посевом.

Готовая среда должна иметь фиолетово-красный цвет.

Допускается хранение в течение 7 сут при температуре (4 2)°С приготовленной и разлитой в пробирки среды, прокипяченной на водяной бане или пастеризованной текучим паром в автоклаве (30,0 0,5) мин.

6.2.4.3 Приготовление среды Эндо

Необходимое количество сухой среды, регламентируемое инструкцией производителя, вносят в 1 дистиллированной воды, тщательно размешивают, затем нагревают и кипятят в течение 3 - 5 мин, не допуская пригорания. Среду готовят непосредственно перед посевом.

6.2.5 Приготовление раствора хлористого натрия

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают (8,50 0,01) г хлористого натрия. Добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.6 Приготовление концентрированного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000  наливают 500  дистиллированной воды, добавляют (34,00 0,01) г однозамещенного фосфорнокислого калия и тщательно перемешивают. Контролируют значение активной кислотности раствора и устанавливают требуемое значение, равное 7,2 ед. рН, раствором гидроокиси натрия массовой долей 20%. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки.

Стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.7 Приготовление разбавленного раствора фосфатного буфера

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают 1,25  концентрированного раствора фосфатного буфера, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  , стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин и используют для приготовления разведений.

6.2.8 Приготовление раствора двузамещенного фосфорнокислого калия для приготовления разведений казеина и пищевых казеинатов

В мерную колбу вместимостью 1000  помещают (20,00 0,01) г двузамещенного фосфорнокислого калия, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Устанавливают активную кислотность 8,4 ед. рН (для приготовления разведений 1:10) и 7,4 ед. рН (для приготовления всех последующих разведений). В качестве кислой среды рекомендуется применять раствор молочной кислоты объемной долей 20%, в качестве щелочной - раствор гидроокиси натрия молярной концентрации 0,1 . Полученный раствор разливают по 10  в пробирки, по 93  в колбы вместимостью 100  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.9 Приготовление раствора лимоннокислого натрия для разведений сыра

(20,00 0,01) г трехзамещенного лимоннокислого натрия растворяют в 1 дистиллированной воды, разливают в пробирки по 10  или в колбы по 93  и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.10 Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов и закваски

В мерную колбу вместимостью 100  помещают (10,00 0,01) г двууглекислого натрия, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки. Полученный раствор разливают по 10 - 20  в пробирки и стерилизуют при температуре (121 1)°С в течение (15 1) мин.

6.2.11 Приготовление реактивов для окраски по Граму

6.2.11.1 Приготовление насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового

10 г кристаллического фиолетового растворяют в 100  этилового спирта.

6.2.11.2 Приготовление водно-спиртового раствора кристаллического фиолетового

1  насыщенного спиртового раствора кристаллического фиолетового по 6.2.11.1 растворяют в 10  дистиллированной воды.

6.2.11.3 Приготовление раствора Люголя