Полученное среднеарифметическое значение числа колоний округляют по ГОСТ 26670:

до числа, кратного 5, - если среднеарифметическое значение числа колоний менее 100 (например 71 до 75; 83 до 85);

до числа, кратного 20, - если среднеарифметическое значение числа колоний более 100 и оканчивается цифрой 5 (например 115 до 120; 125 до 140);

до числа, кратного 10, - если среднеарифметическое значение числа колоний более 100 и не оканчивается цифрой 5 (например 116 до 110; 111 до 110; 121 до 120).

6.1.2.3 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в пересчете на 1,0 г ( ) продукта проводят по ГОСТ 26670.

Количество микроорганизмов в 1,0 г ( ) продукта М вычисляют по формуле.

где N - степень разведения навески;

m - количество инокулята, внесенное в чашку Петри, ;

С - округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) выражается или КОЕ/г, где КОЕ - колониеобразующая единица.

Результат вычисления выражают числом от 1,0 до .

Пример: ; .

6.2 Определение количества мезофильных аэробных микроорганизмов

Метод основан на высеве нормируемого объема напитка с использованием мембранных фильтров на плотный питательный агар, инкубировании посева и подсчете всех видимых колоний, выросших на фильтре.

Метод предназначен для определения микроорганизмов в напитках с использованием подсластителей и заменителей сахара.

6.2.1 Проведение испытаний

6.2.1.1 Нормируемый объем исследуемой пробы напитка (100 ), отобранной по 3.1, фильтруют через мембрану по 5.4.

6.2.1.2 По окончании фильтрации фильтр переносят в чашку Петри на поверхность питательной среды, приготовленной по 5.3.1. Чашки закрывают и на дне чашки против каждого фильтра ставят номер колбы. Из каждой пробы делают посев в двух повторностях.

6.2.1.3 Чашки с посевами помещают в термостат при температуре ( )°С на ( ) ч.

6.2.2 Обработка результатов

6.2.2.1 Количество выросших колоний подсчитывают на каждом фильтре, пользуясь лупой с увеличением в . При большом числе колоний фильтр делят на сектора и находят общее число колоний, выросших на всей поверхности фильтра.

6.2.2.2 После подсчета колоний на фильтре с параллельной пробой находят среднеарифметическое значение числа колоний, округляют до числа, кратного 5, по 6.1.2.2. Полученный результат является количеством аэробных микроорганизмов (КМАэМ), выраженным КОЕ/100 .

6.3 Определение бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)

Метод основан на выявлении бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) по сбраживанию лактозы с образованием кислоты и газа при °С в течение 24 ч. К бактериям группы кишечных палочек (колиформных бактерий) относятся грамотрицательные, бесспоровые палочки, принадлежащие к родам Echerichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia (т.e. как цитратотрицательные, так и цитратположительные представители энергобактерий).

Определение БГКП (колиформных бактерий) проводят методом мембранной фильтрации или прямым посевом в питательную среду.

Метод мембранной фильтрации основан на фильтровании нормируемого объема продукта через мембранный фильтр, инкубировании посевов на агаризованной селективной среде с лактозой и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.

Метод прямого посева основан на накоплении бактерий посевом нормируемого объема или его разведения в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании, пересеве, при необходимости, на агаризованную селективную среду с лактозой и идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.

6.3.1 Проведение испытаний

Метод мембранной фильтрации используют для посева прозрачных и замутненных напитков, легко фильтруемых через мембрану.

Метод прямого посева - для соковых напитков с мякотью плода и загустителями, концентратов для напитков в потребительской таре, квасе брожения.

Анализ проводят в двух повторностях.

6.3.1.1 Метод мембранной фильтрации

Нормируемый объем пробы напитка (100 ), отобранной по 3.1, фильтруют по 5.4. Фильтр укладывают на агаризованную селективную среду Эндо, приготовленную по 5.3.3, разлитую в чашки Петри по ГОСТ 26670.

При посеве методом мембранной фильтрации освобождение от двуокиси углерода и нейтрализацию напитка не проводят.

6.3.1.2 Метод прямого посева

Посев продукта проводят в жидкую селективную среду Кесслер с лактозой, приготовленную по 5.3.2. Соотношение между количеством высеваемого продукта и питательной средой 1:9, а для среды двойной концентрации 1:1.

Перед посевом напитка в среду Кесслер его освобождают от двуокиси углерода по ГОСТ 26669 (2.6.8) и нейтрализуют стерильным раствором гидроокиси натрия для предотвращения резкого снижения pH среды Кесслер (на 0,5 и более).

Значение pH среды Кесслер при посеве в нее продукта доводят до допустимых значений стерильным раствором гидроокиси натрия или при приготовлении среды pH устанавливают выше заданного с учетом его последующего значения при внесении продукта. Количество добавляемого раствора гидроокиси натрия или величину, на которую необходимо увеличить pH при приготовлении питательной среды, устанавливают опытным путем.

6.3.1.2.1 Нормируемый объем пробы напитка (100 ) засевают в среду Кесслер с лактозой двойной концентрации, разлитую по 100 во флаконы с поплавком.

6.3.1.2.2 Нормируемый объем пробы концентрата для напитка в потребительской таре (1 ) помещают в пробирку с 9 стерильной питьевой воды, перемешивают и засевают в пробирку с 10 среды Кесслер двойной концентрации с поплавком.

6.3.1.2.3 Квас брожения, приготовленный на чистых культурах, в количестве 1,0 (нормируемый объем) засевают в пробирку с 9 среды Кесслер с поплавком.

6.3.1.2.4 Для посева кваса брожения, приготовленного на хлебопекарных дрожжах, делают разведение по ГОСТ 26669: 1 кваса разводят в 9 стерильной питьевой воды (разведение 1:10). Из разведения берут 1 (что соответствует нормируемому объему кваса - 0,1 ), засевают в пробирку с 9 среды Кесслер с поплавком.

6.3.1.3 Посевы на средах Эндо и Кесслер инкубируют при температуре ( )°С в течение 24 - 48 ч. Чашки Петри с посевами инкубируют дном вверх. Посевы просматривают через ( ) ч, отмечают положительные результаты посевов в среду Кесслер, а окончательный учет проводят через ( ) ч.

Положительными результатами посева в среду Кесслер считают посевы, в которых имеет место интенсивный рост микроорганизмов, проявляющийся в помутнении среды, образовании газа.

6.3.1.4 Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на среде Кесслер, к колиформным бактериям делают пересевы по ГОСТ 26670 на поверхность среды Эндо, приготовленную по 5.3.3. Посевы инкубируют при температуре ( ) °С в течение ( ) ч.

6.3.1.5 Посевы на среде Эндо по 6.3.1.1 и 6.3.1.4 после инкубирования просматривают и отмечают рост типичных колоний для бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) - красных с металлическим блеском или без него, розовых и бледно-розовых. Типичные колонии для колиформных бактерий имеют отпечаток на обратной стороне фильтра или на среде Эндо после снятия петлей колонии. Для повышения дифференцирующих свойств среды Эндо (проявления отпечатков) в нее добавляют 5%-й спиртовый раствор основного фуксина по 5.2.3.

6.3.1.6 При обнаружении на чашках со средой Эндо мелких бесцветных колоний, подозрительных на возбудителей кишечных инфекций, микробиолог лаборатории должен указанные чашки передать в лабораторию санитарно-эпидемиологической станции для дальнейшего изучения по ГОСТ 30519.

6.3.1.7 При необходимости подтверждения принадлежности выросших колоний микроорганизмов на среде Эндо к колиформным бактериям из колоний приготовляют препараты, окрашивают по Граму и микроскопируют.