Действующий
Бензидин-основание ч.
Углекислый газ (в баллоне или получаемый в аппарате Киппа) или азот.
Хлороформ для наркоза или ч.д.а.
Сурьма треххлористая.
Эфир этиловый (серный).
Калий иодистый х.ч.
Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.
8. Приготовление и очистка некоторых реактивов. Реактивы, применяемые при определении витамина А, подлежат очистке и предварительной обработке.
Натрий сернокислый кристаллический прокаливают для обезвоживания, а безводный просушивают при 105 - 110°С.
Углекислый газ или азот для очистки от примесей пропускают через поглотители с водой, щелочным раствором марганцевокислого калия и серной кислотой.
Хлороформ промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают безводным сернокислым натрием, перегоняют в склянку темного стекла и хранят в прохладном месте. Хлороформ необходимо проверять на отсутствие фосгена по качественной реакции с бензидином.
Сурьма треххлористая. Продажную треххлористую сурьму промывают хлороформом, пока не будет стекать прозрачный и бесцветный раствор, и высушивают в эксикаторе над серной кислотой в течение 1-2 суток. Насыщенный раствор треххлористой сурьмы в очищенном хлороформе приготовляют при 20°С.
Эфир этиловый (серный). В склянку с корковой пробкой помещают 500 эфира, 50 4%-ного раствора , 5 40%-ного раствора NaOH или КОН, взбалтывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в делительную воронку, нижний слой сливают, а эфир промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают в течение суток сернокислым натрием, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир необходимо проверять на отсутствие перекисей по качественной реакции с иодистым калием.
9. Подготовка к калориметрированию
а) Жиры рыб и морских млекопитающих (натуральные и витаминизированные)
1) Навеску жира в количестве от 0,5 до 1 г омыляют 0,5 н. спиртовым раствором едкого кали (10 ) в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85 - 90°С с обратным холодильником.
2) Омыленный раствор разбавляют 20 воды. Неомыляемую фракцию трижды экстрагируют в делительной воронке серным эфиром, свободным от перекиси: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й - по 25 эфира. Во избежание образования стойкой эмульсии, экстракцию эфиром производят лишь в хорошо охлажденном растворе и путем осторожного перемешивания содержимого воронки,
3) Соединенные эфирные вытяжки промывают 3-4 раза водой (по 20 ) до нейтральной реакции промывных вод на лакмус.
4) В промытую эфирную вытяжку добавляют 6-8 г сернокислого натрия и высушивают в течение 30 мин, периодически взбалтывая, затем фильтруют и отгоняют эфир в токе инертного газа.
5) Неомыляемый остаток растворяют в хлороформе, количество которого берут в зависимости от предполагаемого содержания витамина А (10 - 25 ), переносят в мерную колбу и раствор доводят до объема хлороформом. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
б) Концентраты витамина А (полуфабрикаты). Навеску концентрата в количестве от 0,2 до 0,5 г омыляют 0,5 н спиртовым раствором КОН (15 ) в течение 1 ч на водяной бане. Дальнейший ход анализа - см. п. 9а, подпункты 2 - 5.
в) Концентраты витамина А (очищенные). Навеску концентрата в количестве около 0,2 г растворяют в хлороформе в мерной колбе емкостью 25 .
Из полученного раствора отбирают от 1 до 10 (в зависимости от активности концентрата) и производят второе разбавление хлороформом в мерной колбе вместимостью 25 . Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
г) Сливочное и топленое масло и маргарин (натуральные и витаминизированные) и растительные витаминизированные масла. Навеску масла или маргарина в количестве от 10 до 20 г омыляют 20-40 (в зависимости от взятой навески) 20%-ного спиртового раствора КОН в течение 1-2 ч на водяной бане при 85 - 90°С. К охлажденному раствору прибавляют двукратный объем воды и проводят экстракцию неомыляемой фракции эфиром, используя на первую экстракцию не менее 75 эфира, на вторую и третью - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 5-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
д) Молоко. От 100 до 200 молока смешивают с объема водного 60%-ного раствора КОН и 20-40 этилового спирта и ставят на 48 ч в темное место при температуре 20-25°С, периодически взбалтывая содержимое колбы. Экстракцию неомыляемого остатка проводят в делительной воронке эфиром отдельными порциями 4 раза: 1-й раз - 75 , последующие - по 30-40 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 2-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
е) Печень. К навеске печени в количестве 3 г добавляют 1 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч до полного растворения ткани. Если ткань полностью не растворяется, добавляют еще 10-20 спирта и продолжают омыление до полного растворения ткани. После омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа, Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
ж) Яйца. К навеске яичного желтка в количестве около 20 г добавляют 6 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч. По окончании омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Не- омыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
з) Драже и таблетки с витамином А. Навеску драже или таблеток в количестве от 1 до 2 г омыляют 10 . 0,5 н спиртового раствора КОН на водяной бане при температуре 85-90°С в течение 30 мин с обратным холодильником. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
и) Витаминизированные кондитерские изделия (конфеты, пряники и пр.). Навеску витаминизированных кондитерских изделий в количестве 20-50 г экстрагируют эфиром холодным способом, затрачивая на каждую экстракцию по 20-50 эфира. Эфирные вытяжки фильтруют, соединяют и отгоняют эфир в токе инертного газа. Остаток после отгонки эфира омыляют 0,5 н спиртовым раствором едкого кали (10 в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником). В дальнейшей поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
к) Определение витамина А в продуктах, содержащих витамин А и каротин. В продуктах, содержащих, кроме витамина А, каротин (сливочное и топленое масло, яйца, молоко, печень и др.), ход анализа изменяется следующим образом. Высушенный эфирный экстракт неомыляемых веществ делят на две части: в одной части определяют после отгонки эфира и растворения остатка в хлороформе витамин А, в другой после отгонки эфира и растворения остатка в петролейном эфире определяют каротин.
10. Колориметрирование. Для колориметрирования применяют упрощенный прибор или электрофотоколориметр.

А. Колориметрирование в упрощенном приборе

а) Описание прибора

Упрощенный прибор (см. чертеж) представляет собой штатив с передвижной шкалой, в которую вставлено 15 пробирок-эталонов из бесцветного стекла. В неподвижной части штатива имеется отверстие для пробирки с испытуемым раствором и окошко, через которое сравнивают окраску последнего с растворами в пробирках-эталонах.
В пробирках-эталонах, имеющих диаметр 1 см и высоту 6 см, содержатся типовые растворы, представляющие собой смесь водных растворов сернокислой меди и азотнокислого кобальта.
Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой.
Размеры прибора:
длина подвижной шкалы с эталонами .............420 мм
ширина " " " " ..............25 "
высота " " " " ..............55 "
Размеры окошка - 40x35 мм.

б) Приготовление типовых растворов

Типовые растворы приготовляют следующим образом: в 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта; из основного раствора, содержащего витамин А, путем разбавления водой приготовляют эталоны согласно приведенной ниже табл. 1.
Для объектов, содержащих мало витамина А, например, молоко, рекомендуется пользоваться пробирками с N 7 до N 21.
800 × 1145 пикс.     Открыть в новом окне

Типовые растворы для пробирок-эталонов

Таблица 1
Номер пробирок
Количество,
Число синих единиц
основного раствора
воды
1
20
0,4
9
2
20
1,6
8,5
3
20
3
8
4
20
4,5
7,5
5
20
6,3
7
6
20
8,7
6,5
7
20
11,6
6
8
20
14,6
5,5
9
20
19
5
10
20
24,4
4,5
11
20
31,6
4
12
20
41,2
3,5
13
20
55,4
3
14
20
74,2
2,5
15
20
104,2
2,0
16
20
131
1,75
17
20
175
1,5
18
20
190
1,25
19
20
240
1
20
20
330
0,75
21
Дистиллированная вода

в) Проведение определений

Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.