Действующий
8. Приготовление и очистка некоторых реактивов. Реактивы, применяемые при определении витамина А, подлежат очистке и предварительной обработке.
Натрий сернокислый кристаллический прокаливают для обезвоживания, а безводный просушивают при 105 - 110°С.
Углекислый газ или азот для очистки от примесей пропускают через поглотители с водой, щелочным раствором марганцевокислого калия и серной кислотой.
Хлороформ промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают безводным сернокислым натрием, перегоняют в склянку темного стекла и хранят в прохладном месте. Хлороформ необходимо проверять на отсутствие фосгена по качественной реакции с бензидином.
Сурьма треххлористая. Продажную треххлористую сурьму промывают хлороформом, пока не будет стекать прозрачный и бесцветный раствор, и высушивают в эксикаторе над серной кислотой в течение 1-2 суток. Насыщенный раствор треххлористой сурьмы в очищенном хлороформе приготовляют при 20°С.
Эфир этиловый (серный). В склянку с корковой пробкой помещают 500 
эфира, 50 
4%-ного раствора 
, 5 
40%-ного раствора NaOH или КОН, взбалтывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в делительную воронку, нижний слой сливают, а эфир промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают в течение суток сернокислым натрием, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир необходимо проверять на отсутствие перекисей по качественной реакции с иодистым калием.
эфира, 50 4%-ного раствора , 5 40%-ного раствора NaOH или КОН, взбалтывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в делительную воронку, нижний слой сливают, а эфир промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают в течение суток сернокислым натрием, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир необходимо проверять на отсутствие перекисей по качественной реакции с иодистым калием.
1) Навеску жира в количестве от 0,5 до 1 г омыляют 0,5 н. спиртовым раствором едкого кали (10 
) в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85 - 90°С с обратным холодильником.
) в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85 - 90°С с обратным холодильником.
2) Омыленный раствор разбавляют 20 
воды. Неомыляемую фракцию трижды экстрагируют в делительной воронке серным эфиром, свободным от перекиси: 1-й раз - 50 
, 2-й и 3-й - по 25 
эфира. Во избежание образования стойкой эмульсии, экстракцию эфиром производят лишь в хорошо охлажденном растворе и путем осторожного перемешивания содержимого воронки,
воды. Неомыляемую фракцию трижды экстрагируют в делительной воронке серным эфиром, свободным от перекиси: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й - по 25 эфира. Во избежание образования стойкой эмульсии, экстракцию эфиром производят лишь в хорошо охлажденном растворе и путем осторожного перемешивания содержимого воронки,
3) Соединенные эфирные вытяжки промывают 3-4 раза водой (по 20 
) до нейтральной реакции промывных вод на лакмус.
) до нейтральной реакции промывных вод на лакмус.
4) В промытую эфирную вытяжку добавляют 6-8 г сернокислого натрия и высушивают в течение 30 мин, периодически взбалтывая, затем фильтруют и отгоняют эфир в токе инертного газа.
), переносят в мерную колбу и раствор доводят до объема хлороформом. Дальнейший ход анализа см.
б) Концентраты витамина А (полуфабрикаты). Навеску концентрата в количестве от 0,2 до 0,5 г омыляют 0,5 н спиртовым раствором КОН (15 
) в течение 1 ч на водяной бане. Дальнейший ход анализа - см. п. 9а, подпункты 2 - 5.
) в течение 1 ч на водяной бане. Дальнейший ход анализа - см. п. 9а, подпункты 2 - 5.
в) Концентраты витамина А (очищенные). Навеску концентрата в количестве около 0,2 г растворяют в хлороформе в мерной колбе емкостью 25 
.
.
(в зависимости от активности концентрата) и производят второе разбавление хлороформом в мерной колбе вместимостью 25 
. Дальнейший ход анализа см.
г) Сливочное и топленое масло и маргарин (натуральные и витаминизированные) и растительные витаминизированные масла. Навеску масла или маргарина в количестве от 10 до 20 г омыляют 20-40 
(в зависимости от взятой навески) 20%-ного спиртового раствора КОН в течение 1-2 ч на водяной бане при 85 - 90°С. К охлажденному раствору прибавляют двукратный объем воды и проводят экстракцию неомыляемой фракции эфиром, используя на первую экстракцию не менее 75 
эфира, на вторую и третью - по 25 
. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 5-10 
хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
(в зависимости от взятой навески) 20%-ного спиртового раствора КОН в течение 1-2 ч на водяной бане при 85 - 90°С. К охлажденному раствору прибавляют двукратный объем воды и проводят экстракцию неомыляемой фракции эфиром, используя на первую экстракцию не менее 75 эфира, на вторую и третью - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 5-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
д) Молоко. От 100 до 200 
молока смешивают с 
объема водного 60%-ного раствора КОН и 20-40 
этилового спирта и ставят на 48 ч в темное место при температуре 20-25°С, периодически взбалтывая содержимое колбы. Экстракцию неомыляемого остатка проводят в делительной воронке эфиром отдельными порциями 4 раза: 1-й раз - 75 
, последующие - по 30-40 
. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 2-10 
хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
молока смешивают с объема водного 60%-ного раствора КОН и 20-40 этилового спирта и ставят на 48 ч в темное место при температуре 20-25°С, периодически взбалтывая содержимое колбы. Экстракцию неомыляемого остатка проводят в делительной воронке эфиром отдельными порциями 4 раза: 1-й раз - 75 , последующие - по 30-40 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 2-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
е) Печень. К навеске печени в количестве 3 г добавляют 1 
60%-ного водного раствора КОН и 10-20 
этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч до полного растворения ткани. Если ткань полностью не растворяется, добавляют еще 10-20 
спирта и продолжают омыление до полного растворения ткани. После омыления к раствору добавляют 10-20 
спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 
, 2-й и 3-й раз - по 25 
. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 10 
хлороформа, Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч до полного растворения ткани. Если ткань полностью не растворяется, добавляют еще 10-20 спирта и продолжают омыление до полного растворения ткани. После омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа, Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
ж) Яйца. К навеске яичного желтка в количестве около 20 г добавляют 6 
60%-ного водного раствора КОН и 10-20 
этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч. По окончании омыления к раствору добавляют 10-20 
спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 
, 2-й и 3-й раз - по 25 
. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Не- омыляемый остаток растворяют в 10 
хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч. По окончании омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Не- омыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.
з) Драже и таблетки с витамином А. Навеску драже или таблеток в количестве от 1 до 2 г омыляют 10 
. 0,5 н спиртового раствора КОН на водяной бане при температуре 85-90°С в течение 30 мин с обратным холодильником. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
. 0,5 н спиртового раствора КОН на водяной бане при температуре 85-90°С в течение 30 мин с обратным холодильником. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
и) Витаминизированные кондитерские изделия (конфеты, пряники и пр.). Навеску витаминизированных кондитерских изделий в количестве 20-50 г экстрагируют эфиром холодным способом, затрачивая на каждую экстракцию по 20-50 
эфира. Эфирные вытяжки фильтруют, соединяют и отгоняют эфир в токе инертного газа. Остаток после отгонки эфира омыляют 0,5 н спиртовым раствором едкого кали (10 
в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником). В дальнейшей поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
эфира. Эфирные вытяжки фильтруют, соединяют и отгоняют эфир в токе инертного газа. Остаток после отгонки эфира омыляют 0,5 н спиртовым раствором едкого кали (10 в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником). В дальнейшей поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.
к) Определение витамина А в продуктах, содержащих витамин А и каротин. В продуктах, содержащих, кроме витамина А, каротин (сливочное и топленое масло, яйца, молоко, печень и др.), ход анализа изменяется следующим образом. Высушенный эфирный экстракт неомыляемых веществ делят на две части: в одной части определяют после отгонки эфира и растворения остатка в хлороформе витамин А, в другой после отгонки эфира и растворения остатка в петролейном эфире определяют каротин.
10. Колориметрирование. Для колориметрирования применяют упрощенный прибор или электрофотоколориметр.
Упрощенный прибор (см. чертеж) представляет собой штатив с передвижной шкалой, в которую вставлено 15 пробирок-эталонов из бесцветного стекла. В неподвижной части штатива имеется отверстие для пробирки с испытуемым раствором и окошко, через которое сравнивают окраску последнего с растворами в пробирках-эталонах.
В пробирках-эталонах, имеющих диаметр 1 см и высоту 6 см, содержатся типовые растворы, представляющие собой смесь водных растворов сернокислой меди и азотнокислого кобальта.
Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой.
Типовые растворы приготовляют следующим образом: в 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта; из основного раствора, содержащего витамин А, путем разбавления водой приготовляют эталоны согласно приведенной ниже табл. 1.
Для объектов, содержащих мало витамина А, например, молоко, рекомендуется пользоваться пробирками с N 7 до N 21.
Номер пробирок | Количество,  | Число синих единиц | |
основного раствора | воды | ||
1 | 20 | 0,4 | 9 |
2 | 20 | 1,6 | 8,5 |
3 | 20 | 3 | 8 |
4 | 20 | 4,5 | 7,5 |
5 | 20 | 6,3 | 7 |
6 | 20 | 8,7 | 6,5 |
7 | 20 | 11,6 | 6 |
8 | 20 | 14,6 | 5,5 |
9 | 20 | 19 | 5 |
10 | 20 | 24,4 | 4,5 |
11 | 20 | 31,6 | 4 |
12 | 20 | 41,2 | 3,5 |
13 | 20 | 55,4 | 3 |
14 | 20 | 74,2 | 2,5 |
15 | 20 | 104,2 | 2,0 |
16 | 20 | 131 | 1,75 |
17 | 20 | 175 | 1,5 |
18 | 20 | 190 | 1,25 |
19 | 20 | 240 | 1 |
20 | 20 | 330 | 0,75 |
21 | Дистиллированная вода | ||
Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 
испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 
хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.
испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.
При определении сравнивают окраску пробирки с испытуемым раствором с окраской пробирок-эталонов через окошечко в передней части прибора, помещая его на белую бумагу.
Пробирку с испытуемым раствором устанавливают в неподвижной части прибора и подводят последовательно к ней пробирки эталоны путем передвижения шкалы.
Определение считают законченным, когда окраска испытуемого раствора совпадет с окраской раствора в одной из пробирок-эталонов.
Содержание витамина А в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталону.
Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках.