м) Свежие травы. Свежие травы берут в количестве не менее 100 г, измельчают ножницами, перемешивают в ступке и тотчас же используют для анализа.

н) Свежие плоды, овощи и ягоды. Пробы овощей и плодов вырезают ножом из нержавеющей стали в форме сегментов и немедленно используют для анализа. Ягоды и мелкие сочные плоды предварительной обработке не подвергаются. Общая масса пробы, поступающей на анализ, должна быть не менее 200 г.

о) Консервы. Консервы после вскрытия банок немедленно переносят в ступку и тщательно и быстро измельчают и размешивают или измельчают на мясорубке.

п) Обеды (при анализе на содержание витамина С). Пробы первых блюд (супы) взвешивают, затем пробы помещают на мелкое волосяное сито или марлю и отделяют жидкую часть от твердой, далее определяют массу жидкой части путем взвешивания и массу оставшейся твердой части - по разности масс. Твердую часть быстро растирают в ступке до однородной консистенции. Определение витамина С в обеих частях производится в отдельности.

Суп-пюре анализируют без разделения на жидкую и твердую часть.

Пробы вторых блюд анализируют так же, как плотную часть первых блюд.

Третьи блюда анализируются соответственно своему характеру, как первые или вторые блюда.

Общие замечания

1) Из подготовленных для анализа проб, как указано в п. 6, берут навески согласно прописи методов анализа.

2) В жидких пробах (сиропы, концентраты) после размешивания определяют по общим правилам плотность для перечисления содержания витамина на единицу объема.

3) Из измельченной и перемешанной пробы берут 2-3 навески. Навески жидких проб (соки, настои, растворы и т.п.) отбирают пипеткой, навески проб густой консистенции (густые сиропы, концентраты и пр.), плохо стекающие из пипетки, берут весовым путем подобно твердым продуктам.

II. Методы определения витамина А

7. Применяемые реактивы

Кали едкое х.ч.

Натр едкий х.ч.

Натрий сернокислый (кристаллический) или безводный х.ч.

Кислота серная ч.

Ангидрид уксусный ч.д.а.

Кобальт азотнокислый ч.д.а.

Медь сернокислая ч.д.а.

Калий марганцевокислый х.ч.

Спирт этиловый ректификат.

Бензидин-основание ч.

Углекислый газ (в баллоне или получаемый в аппарате Киппа) или азот.

Хлороформ для наркоза или ч.д.а.

Сурьма треххлористая.

Эфир этиловый (серный).

Калий иодистый х.ч.

Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.

8. Приготовление и очистка некоторых реактивов. Реактивы, применяемые при определении витамина А, подлежат очистке и предварительной обработке.

Натрий сернокислый кристаллический прокаливают для обезвоживания, а безводный просушивают при 105 - 110°С.

Углекислый газ или азот для очистки от примесей пропускают через поглотители с водой, щелочным раствором марганцевокислого калия и серной кислотой.

Хлороформ промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают безводным сернокислым натрием, перегоняют в склянку темного стекла и хранят в прохладном месте. Хлороформ необходимо проверять на отсутствие фосгена по качественной реакции с бензидином.

Сурьма треххлористая. Продажную треххлористую сурьму промывают хлороформом, пока не будет стекать прозрачный и бесцветный раствор, и высушивают в эксикаторе над серной кислотой в течение 1-2 суток. Насыщенный раствор треххлористой сурьмы в очищенном хлороформе приготовляют при 20°С.

Эфир этиловый (серный). В склянку с корковой пробкой помещают 500 эфира, 50 4%-ного раствора , 5 40%-ного раствора NaOH или КОН, взбалтывают и оставляют на сутки в темноте. Смесь переносят в делительную воронку, нижний слой сливают, а эфир промывают 5-6 раз дистиллированной водой (в отношении 2:1), высушивают в течение суток сернокислым натрием, перегоняют и сохраняют в темноте. Эфир необходимо проверять на отсутствие перекисей по качественной реакции с иодистым калием.

9. Подготовка к калориметрированию

а) Жиры рыб и морских млекопитающих (натуральные и витаминизированные)

1) Навеску жира в количестве от 0,5 до 1 г омыляют 0,5 н. спиртовым раствором едкого кали (10 ) в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85 - 90°С с обратным холодильником.

2) Омыленный раствор разбавляют 20 воды. Неомыляемую фракцию трижды экстрагируют в делительной воронке серным эфиром, свободным от перекиси: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й - по 25 эфира. Во избежание образования стойкой эмульсии, экстракцию эфиром производят лишь в хорошо охлажденном растворе и путем осторожного перемешивания содержимого воронки,

3) Соединенные эфирные вытяжки промывают 3-4 раза водой (по 20 ) до нейтральной реакции промывных вод на лакмус.

4) В промытую эфирную вытяжку добавляют 6-8 г сернокислого натрия и высушивают в течение 30 мин, периодически взбалтывая, затем фильтруют и отгоняют эфир в токе инертного газа.

5) Неомыляемый остаток растворяют в хлороформе, количество которого берут в зависимости от предполагаемого содержания витамина А (10 - 25 ), переносят в мерную колбу и раствор доводят до объема хлороформом. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

б) Концентраты витамина А (полуфабрикаты). Навеску концентрата в количестве от 0,2 до 0,5 г омыляют 0,5 н спиртовым раствором КОН (15 ) в течение 1 ч на водяной бане. Дальнейший ход анализа - см. п. 9а, подпункты 2 - 5.

в) Концентраты витамина А (очищенные). Навеску концентрата в количестве около 0,2 г растворяют в хлороформе в мерной колбе емкостью 25 .

Из полученного раствора отбирают от 1 до 10 (в зависимости от активности концентрата) и производят второе разбавление хлороформом в мерной колбе вместимостью 25 . Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

г) Сливочное и топленое масло и маргарин (натуральные и витаминизированные) и растительные витаминизированные масла. Навеску масла или маргарина в количестве от 10 до 20 г омыляют 20-40 (в зависимости от взятой навески) 20%-ного спиртового раствора КОН в течение 1-2 ч на водяной бане при 85 - 90°С. К охлажденному раствору прибавляют двукратный объем воды и проводят экстракцию неомыляемой фракции эфиром, используя на первую экстракцию не менее 75 эфира, на вторую и третью - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 5-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

д) Молоко. От 100 до 200 молока смешивают с объема водного 60%-ного раствора КОН и 20-40 этилового спирта и ставят на 48 ч в темное место при температуре 20-25°С, периодически взбалтывая содержимое колбы. Экстракцию неомыляемого остатка проводят в делительной воронке эфиром отдельными порциями 4 раза: 1-й раз - 75 , последующие - по 30-40 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 2-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

е) Печень. К навеске печени в количестве 3 г добавляют 1 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч до полного растворения ткани. Если ткань полностью не растворяется, добавляют еще 10-20 спирта и продолжают омыление до полного растворения ткани. После омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа, Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

ж) Яйца. К навеске яичного желтка в количестве около 20 г добавляют 6 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч. По окончании омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Не- омыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

з) Драже и таблетки с витамином А. Навеску драже или таблеток в количестве от 1 до 2 г омыляют 10 . 0,5 н спиртового раствора КОН на водяной бане при температуре 85-90°С в течение 30 мин с обратным холодильником. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.