д) Молоко. От 100 до 200 молока смешивают с объема водного 60%-ного раствора КОН и 20-40 этилового спирта и ставят на 48 ч в темное место при температуре 20-25°С, периодически взбалтывая содержимое колбы. Экстракцию неомыляемого остатка проводят в делительной воронке эфиром отдельными порциями 4 раза: 1-й раз - 75 , последующие - по 30-40 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 2-10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

е) Печень. К навеске печени в количестве 3 г добавляют 1 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч до полного растворения ткани. Если ткань полностью не растворяется, добавляют еще 10-20 спирта и продолжают омыление до полного растворения ткани. После омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Неомыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа, Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

ж) Яйца. К навеске яичного желтка в количестве около 20 г добавляют 6 60%-ного водного раствора КОН и 10-20 этилового спирта и нагревают на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником не менее 2 ч. По окончании омыления к раствору добавляют 10-20 спирта и двойное (по отношению к общему объему спирта) количество воды; неомыляемую фракцию трижды экстрагируют эфиром: 1-й раз - 50 , 2-й и 3-й раз - по 25 . Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 3 и 4. Не- омыляемый остаток растворяют в 10 хлороформа. Дальнейший ход анализа см. п. 10 А и Б.

з) Драже и таблетки с витамином А. Навеску драже или таблеток в количестве от 1 до 2 г омыляют 10 . 0,5 н спиртового раствора КОН на водяной бане при температуре 85-90°С в течение 30 мин с обратным холодильником. Далее поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.

и) Витаминизированные кондитерские изделия (конфеты, пряники и пр.). Навеску витаминизированных кондитерских изделий в количестве 20-50 г экстрагируют эфиром холодным способом, затрачивая на каждую экстракцию по 20-50 эфира. Эфирные вытяжки фильтруют, соединяют и отгоняют эфир в токе инертного газа. Остаток после отгонки эфира омыляют 0,5 н спиртовым раствором едкого кали (10 в течение 30 мин - 1 ч на водяной бане при 85-90°С с обратным холодильником). В дальнейшей поступают, как указано в п. 9а, подпункты 2-5.

к) Определение витамина А в продуктах, содержащих витамин А и каротин. В продуктах, содержащих, кроме витамина А, каротин (сливочное и топленое масло, яйца, молоко, печень и др.), ход анализа изменяется следующим образом. Высушенный эфирный экстракт неомыляемых веществ делят на две части: в одной части определяют после отгонки эфира и растворения остатка в хлороформе витамин А, в другой после отгонки эфира и растворения остатка в петролейном эфире определяют каротин.

10. Колориметрирование. Для колориметрирования применяют упрощенный прибор или электрофотоколориметр.

А. Колориметрирование в упрощенном приборе

а) Описание прибора

Упрощенный прибор (см. чертеж) представляет собой штатив с передвижной шкалой, в которую вставлено 15 пробирок-эталонов из бесцветного стекла. В неподвижной части штатива имеется отверстие для пробирки с испытуемым раствором и окошко, через которое сравнивают окраску последнего с растворами в пробирках-эталонах.

В пробирках-эталонах, имеющих диаметр 1 см и высоту 6 см, содержатся типовые растворы, представляющие собой смесь водных растворов сернокислой меди и азотнокислого кобальта.

Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой.

Размеры прибора:

длина подвижной шкалы с эталонами .............420 мм

ширина " " " " ..............25 "

высота " " " " ..............55 "

Размеры окошка - 40x35 мм.

б) Приготовление типовых растворов

Типовые растворы приготовляют следующим образом: в 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта; из основного раствора, содержащего витамин А, путем разбавления водой приготовляют эталоны согласно приведенной ниже табл. 1.

Для объектов, содержащих мало витамина А, например, молоко, рекомендуется пользоваться пробирками с N 7 до N 21.

800 × 1145 пикс.     Открыть в новом окне

Типовые растворы для пробирок-эталонов

Номер пробирок	Количество,		Число синих единиц
	основного раствора	воды
1	20	0,4	9
2	20	1,6	8,5
3	20	3	8
4	20	4,5	7,5
5	20	6,3	7
6	20	8,7	6,5
7	20	11,6	6
8	20	14,6	5,5
9	20	19	5
10	20	24,4	4,5
11	20	31,6	4
12	20	41,2	3,5
13	20	55,4	3
14	20	74,2	2,5
15	20	104,2	2,0
16	20	131	1,75
17	20	175	1,5
18	20	190	1,25
19	20	240	1
20	20	330	0,75
21	Дистиллированная вода

в) Проведение определений

Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.

При определении сравнивают окраску пробирки с испытуемым раствором с окраской пробирок-эталонов через окошечко в передней части прибора, помещая его на белую бумагу.

Пробирку с испытуемым раствором устанавливают в неподвижной части прибора и подводят последовательно к ней пробирки эталоны путем передвижения шкалы.

Определение считают законченным, когда окраска испытуемого раствора совпадет с окраской раствора в одной из пробирок-эталонов.

Содержание витамина А в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталону.

Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках.

Наиболее точные результаты получают при колориметрировании раствора в пределах от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы разбавляют соответствующим образом хлороформом и проводят определение повторно.

Примечание. При необходимости получения большего объема колориметрируемого раствора можно увеличить его вдвое, втрое и больше, соответственно сохраняя указанное соотношение количества испытуемого раствора и треххлористой сурьмы.

г) Вычисление содержания витамина А

Количество витамина A ( ) в граммах на 1 г продукта вычисляют по формуле

где а - число синих единиц, установленное при колориметрировании;

V - объем раствора хлороформа, ;

m - навеска, г;

- коэффициенты пересчета в гаммы витамина А;

1000 - коэффициент пересчета в миллиграммы.

Количество витамина А ( ) в ин. ед. (интернациональных единицах) на 1 г продукта вычисляют по формуле

где 0,3 - коэффициент перевода числа гамм витамина А в ин. ед.

Остальные обозначения те же, что и в предыдущей формуле.

Б. Колориметрирование в электрофотоколориметре

а) Требования, предъявляемые к электрофотоколориметру. Электрофотоколориметры, применяемые для определения витамина А, должны соответствовать следующим требованиям:

обеспечить проведение измерения (отсчета) в течение 5-10 с;

обеспечить хорошую воспроизводимость результатов и пропорциональность отсчетов концентрации витамина А;

иметь достаточно монохроматический светофильтр с максимумом пропускания 620 м ;