Действующий
Метод основан на колориметрическом определении количества субстрата, расщепленного в условиях проведения ферментативной реакции, и последующем вычислении диастазного числа.
Диастазное число выражают количеством кубических сантиметров раствора крахмала массовой долей 1%, которое разлагается за 1 ч амилолитическими ферментами, содержащимися в 1 г безводного вещества меда. 1 
раствора крахмала соответствует 1 единице активности.
раствора крахмала соответствует 1 единице активности.
Аппаратура, материалы, реактивы. Фотоэлектроколориметр; pH-метр; электрод измерительный стеклянный; баня-термостат водяная на 20 и 40°C; пробирки стеклянные диаметром 20 мм и высотой 200 мм; бюретка вместимостью 25 
с ценой деления 0,1 
; пипетки вместимостью 1, 2 и 5 
; колбы мерные вместимостью 50 
; секундомер; крахмал растворимый для йодометрии, раствор массовой долей 0,25%; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 
, раствор концентрации 0,2 
; ацетат натрия трехводный, раствор концентрации 0,2 
; хлорид натрия, раствор концентрации 0,1 
; 2,4-динитрофенол; йод, раствор концентрации 0,25 
; раствор буферный стандартный с pH, близким к 5,0, для проверки стеклянного электрода; вода дистиллированная.
с ценой деления 0,1 ; пипетки вместимостью 1, 2 и 5 ; колбы мерные вместимостью 50 ; секундомер; крахмал растворимый для йодометрии, раствор массовой долей 0,25%; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 , раствор концентрации 0,2 ; ацетат натрия трехводный, раствор концентрации 0,2 ; хлорид натрия, раствор концентрации 0,1 ; 2,4-динитрофенол; йод, раствор концентрации 0,25 ; раствор буферный стандартный с pH, близким к 5,0, для проверки стеклянного электрода; вода дистиллированная.
Подготовка к испытанию. Ацетатный буферный раствор концентрации 0,2 
с pH 5,0 приготовляют, смешивая одну объемную часть раствора уксусной кислоты и три объемных части раствора ацетата натрия. В полученном буферном растворе растворяют 2,4-динитрофенол с таким расчетом, чтобы его концентрация в комбинированном реактиве составила 0,05%. Проверяют pH раствора потенциометрически и в случае отклонений от pH 5,0 его корректируют, добавляя раствор уксусной кислоты 0,3 
или раствор ацетата натрия концентрации 0,2 
.
с pH 5,0 приготовляют, смешивая одну объемную часть раствора уксусной кислоты и три объемных части раствора ацетата натрия. В полученном буферном растворе растворяют 2,4-динитрофенол с таким расчетом, чтобы его концентрация в комбинированном реактиве составила 0,05%. Проверяют pH раствора потенциометрически и в случае отклонений от pH 5,0 его корректируют, добавляя раствор уксусной кислоты 0,3 или раствор ацетата натрия концентрации 0,2 .
Комбинированный реактив готовят из восьми объемных частей раствора крахмала, пяти объемных частей буферного раствора с 2,4-динитрофенолом и одной объемной части раствора хлорида натрия. При приготовлении комбинированного реактива в количестве, равном или большем 1 
, объем соответствующих растворов отмеривают с точностью до 0,5 
. Полученную смесь тщательно встряхивают. Реактивы хранят при комнатной температуре не более 3 мес.
, объем соответствующих растворов отмеривают с точностью до 0,5 . Полученную смесь тщательно встряхивают. Реактивы хранят при комнатной температуре не более 3 мес.
Раствор меда. 5 г меда, взвешенного с точностью до 0,01 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 50 
. 1 
такого раствора содержит 0,1 г меда.
. 1 такого раствора содержит 0,1 г меда.
Раствор крахмала. 0,25 г крахмала, взвешенного с точностью до 0,001 г, размешивают в стаканчике вместимостью 50 
с 10 - 20 
дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу, где не сильно кипит 80 - 90 
дистиллированной воды. Кипение продолжают 2 - 3 мин. Колбу охлаждают до 20°C, содержимое количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 
и доводят до метки.
с 10 - 20 дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу, где не сильно кипит 80 - 90 дистиллированной воды. Кипение продолжают 2 - 3 мин. Колбу охлаждают до 20°C, содержимое количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 и доводят до метки.
Проведение испытания. В сухую пробирку отмеривают из бюретки 14 
комбинированного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают на 10 мин в водяную баню с температурой 40°C. Затем в пробирку вносят пипеткой 1 
раствора меда. Содержимое перемешивают пятикратным перевертыванием, и пробирку вновь помещают на водяную баню, одновременно включая секундомер. Пробирку выдерживают на водяной бане в течение 15 мин. при температуре (
)°C.
комбинированного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают на 10 мин в водяную баню с температурой 40°C. Затем в пробирку вносят пипеткой 1 раствора меда. Содержимое перемешивают пятикратным перевертыванием, и пробирку вновь помещают на водяную баню, одновременно включая секундомер. Пробирку выдерживают на водяной бане в течение 15 мин. при температуре ( )°C.
Пипеткой отбирают 2 
реакционной смеси, которую вносят при перемешивании в мерную колбу вместимостью 50 
, содержащую 40 
воды и 1 
раствора йода, имеющих температуру 20°C. Раствор доводят водой до метки. Колбу закрывают пробкой, содержимое хорошо перемешивают и выдерживают на водяной бане при 20°C в течение 10 мин.
реакционной смеси, которую вносят при перемешивании в мерную колбу вместимостью 50 , содержащую 40 воды и 1 раствора йода, имеющих температуру 20°C. Раствор доводят водой до метки. Колбу закрывают пробкой, содержимое хорошо перемешивают и выдерживают на водяной бане при 20°C в течение 10 мин.
Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре против воды при светофильтре с длиной волны 582 или 590 нм, используя кювету с рабочей длиной 10 мм. Значения оптической плотности испытуемого раствора (
) и контрольного опыта (
) записывают с точностью 0,001.
) и контрольного опыта ( ) записывают с точностью 0,001.
Обработка результатов. Диастазное число меда (X, ед. Готе) в пересчете на 1 г безводного вещества вычисляют по формуле:
, (98)
- оптическая плотность контрольного раствора;
- оптическая плотность испытуемого раствора;
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допустимые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,5 ед. Готе в интервале величин менее 10 ед.
Метод основан на образовании в кислой среде соединения оксиметилфурфурола с резорцином, окрашенного в вишнево-красный цвет.
Материалы и реактивы. Ступки фарфоровые диаметром 70 мм с пестиком; чашки фарфоровые диаметром 50 мм; эфир этиловый; хлорид кальция 2-водный; резорцин; кислота соляная концентрированная плотностью 1,19 
; натрий металлический плавленый.
; натрий металлический плавленый.
Подготовка к испытанию. Безводный эфир: эфир выдерживают не менее двух суток с хлоридом кальция (200 г хлорида кальция на 1 
эфира) и быстро фильтруют через бумажный фильтр в склянку оранжевого стекла; в склянку с эфиром помещают нарезанный кусочками металлический натрий (около 20 г на 1 
эфира); эфир выдерживают с натрием до тех пор, пока внесение дополнительного кусочка натрия не будет сопровождаться выделением пузырьков газа; высушенный эфир хранят в склянке с притертой пробкой в прохладном и затемненном месте.
эфира) и быстро фильтруют через бумажный фильтр в склянку оранжевого стекла; в склянку с эфиром помещают нарезанный кусочками металлический натрий (около 20 г на 1 эфира); эфир выдерживают с натрием до тех пор, пока внесение дополнительного кусочка натрия не будет сопровождаться выделением пузырьков газа; высушенный эфир хранят в склянке с притертой пробкой в прохладном и затемненном месте.
Раствор резорцина с массовой долей 1% : 1 г резорцина растворяют в 100 
концентрированной соляной кислоты (раствор должен быть бесцветным) и хранят в прохладном месте в склянке оранжевого стекла с притертой пробкой.
концентрированной соляной кислоты (раствор должен быть бесцветным) и хранят в прохладном месте в склянке оранжевого стекла с притертой пробкой.
Проведение испытания. В сухой фарфоровой ступке тщательно перемешивают пестиком в течение 2 - 3 мин около 3 г меда и 15 
эфира. Эфирную вытяжку переносят в сухую фарфоровую чашку и повторяют перемешивание меда с новой порцией эфира. Эфирные вытяжки объединяют и дают эфиру испариться под тягой при температуре не выше 30°C. К остатку прибавляют 2 - 3 капли раствора резорцина.
эфира. Эфирную вытяжку переносят в сухую фарфоровую чашку и повторяют перемешивание меда с новой порцией эфира. Эфирные вытяжки объединяют и дают эфиру испариться под тягой при температуре не выше 30°C. К остатку прибавляют 2 - 3 капли раствора резорцина.
Появление розового или оранжевого окрашивания в течение 5 мин свидетельствует о наличии оксиметилфурфурола.
Метод основан на колориметрическом определении оксиметилфурфурола в присутствии барбитуровой кислоты и паратолуидина.
Аппаратура, материалы, реактивы. Весы лабораторные; фотоэлектроколориметр; баня водяная; часы песочные на 1 мин; электроплитка или газовая горелка; термометр лабораторный до 100°C; колбы мерные вместимостью 50 
; пробирки стеклянные с притертой пробкой, вместимостью 10 
; пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 
; барбитуровая кислота пара-толуидин; изопропанол; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 
; вода дистиллированная; гексацианоферрат калия; сульфат цинка кристаллогидрат семиводный.
; пробирки стеклянные с притертой пробкой, вместимостью 10 ; пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 ; барбитуровая кислота пара-толуидин; изопропанол; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 ; вода дистиллированная; гексацианоферрат калия; сульфат цинка кристаллогидрат семиводный.
Подготовка к испытанию. Раствор барбитуровой кислоты: 500 мг барбитуровой кислоты, высушенной при 105°C в течение 1 ч, переносят в колбу на 100 
, добавляют 70 
дистиллированной воды, растворяют при нагревании в водяной бане, охлаждают до 20°C и доводят до метки. Раствор можно хранить при охлаждении длительное время. В случае образования кристаллов раствор нагревают на водяной бане примерно до 60°C до полного растворения кристаллов. Колба должна быть закрыта легко вынимаемой пробкой.
, добавляют 70 дистиллированной воды, растворяют при нагревании в водяной бане, охлаждают до 20°C и доводят до метки. Раствор можно хранить при охлаждении длительное время. В случае образования кристаллов раствор нагревают на водяной бане примерно до 60°C до полного растворения кристаллов. Колба должна быть закрыта легко вынимаемой пробкой.
Раствор пара-толуидина: 10 г пара-толуидина при температуре 44 - 45°C растворяют в 50 
изопропанола при слабом нагревании на водяной бане, переносят в мерную колбу вместимостью 100 
, добавляют 10 
ледяной уксусной кислоты при перемешивании и при 20°C доводят изопропанолом до метки. Раствор используют через 24 ч после приготовления, хранят в прохладном и темном месте не более 1 мес. Реактив Керреса: 15 г гексацианоферрата калия растворяют в дистиллированной воде в колбе вместимостью 100 
; 20,4 г сульфата цинка кристаллогидрата растворяют в дистиллированной воде в колбе вместимостью 100 
.
изопропанола при слабом нагревании на водяной бане, переносят в мерную колбу вместимостью 100 , добавляют 10 ледяной уксусной кислоты при перемешивании и при 20°C доводят изопропанолом до метки. Раствор используют через 24 ч после приготовления, хранят в прохладном и темном месте не более 1 мес. Реактив Керреса: 15 г гексацианоферрата калия растворяют в дистиллированной воде в колбе вместимостью 100 ; 20,4 г сульфата цинка кристаллогидрата растворяют в дистиллированной воде в колбе вместимостью 100 .
Раствор меда: (
) г меда растворяют приблизительно в 20 
свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 
. Мутные растворы осветляют реактивом Керреса. Для этого в колбу добавляют одну каплю гексацианоферрата калия, перемешивают, добавляют одну каплю сульфата цинка и при 20°C доводят водой до метки. Перемешивают и отфильтровывают через неплотный фильтр. Раствор используют немедленно.
) г меда растворяют приблизительно в 20 свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 . Мутные растворы осветляют реактивом Керреса. Для этого в колбу добавляют одну каплю гексацианоферрата калия, перемешивают, добавляют одну каплю сульфата цинка и при 20°C доводят водой до метки. Перемешивают и отфильтровывают через неплотный фильтр. Раствор используют немедленно.
Проведение испытания. В две чистые сухие пробирки наливают по 2 
раствора меда и 5 
пара-толуидина. В одну пробирку добавляют 1 
дистиллированной воды (контроль), перемешивают и содержимым этой пробирки заполняют кювету с толщиной слоя раствора 10 мм. Не позднее чем через 1 - 2 мин, во вторую пробирку приливают 1 
барбитуровой кислоты, перемешивают и заполняют вторую кювету.
раствора меда и 5 пара-толуидина. В одну пробирку добавляют 1 дистиллированной воды (контроль), перемешивают и содержимым этой пробирки заполняют кювету с толщиной слоя раствора 10 мм. Не позднее чем через 1 - 2 мин, во вторую пробирку приливают 1 барбитуровой кислоты, перемешивают и заполняют вторую кювету.
Измерение производят на фотоэлектроколориметре со светофильтром с максимумом пропускания (
) нм по отношению к контрольному раствору ежеминутно в течение 6 мин.
) нм по отношению к контрольному раствору ежеминутно в течение 6 мин.
, (99)
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
Один из методов определения натуральности меда - реакция на фосфор, применяемая для определения его содержания в растениях.
Аппаратура, материалы, реактивы. Весы лабораторные; колбы мерные вместимостью 100 
; цилиндры мерные на 10; 50; 100 
; фильтры; молибденовокислый аммоний, раствор массовой долей 6%; азотная кислота концентрированная плотностью 1,4 
; раствор бензидина; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 
; ацетат натрия; дистиллированная вода.
; цилиндры мерные на 10; 50; 100 ; фильтры; молибденовокислый аммоний, раствор массовой долей 6%; азотная кислота концентрированная плотностью 1,4 ; раствор бензидина; кислота уксусная ледяная плотностью 1,07 ; ацетат натрия; дистиллированная вода.
молибденовокислого аммония, раствор массовой долей 6%, добавляют 35 
концентрированной азотной кислоты.