(Действующий) Временные гигиенические нормативы содержания N-нитрозаминов в пищевых...

Докипедия просит пользователей использовать в своей электронной переписке скопированные части текстов нормативных документов. Автоматически генерируемые обратные ссылки на источник информации, доставят удовольствие вашим адресатам.

Действующий
2.17. Колбы мерные или пробирки мерные емкостью 2, 5, 25, 50 мл по ГОСТ 1770-74Е.
2.18. Холодильник Либиха с алонжем по ГОСТ 9499-70.
2.19. Холодильник обратный по ГОСТ 23932-79Е и 25336-82Е.
2.20. Насадка для паровика изготовлена по эскизу (см. рис., поз. 8).
2.21. Колбы круглодонные на 1000 и 5 мл по ТУ 48-52.
2.22. Делительные воронки емкостью 5 и 250 мл по ГОСТ 23932-79Е и 25336-82Е.
2.23 Эксикатор.
2.24. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
2.25. Бромистоводородная кислота концентрированная (HBr) по ГОСТ 2062-67. 31%-ный раствор НВr в ледяной уксусной кислоте (НВr/АсОН) готовят: к 50 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 100 мл НВr.
2.26. Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, водный раствор 0.1 н.
2.27. Кислота серная по ГОСТ 4204-77, хч.
2.28. Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61-75.
2.29. Метилен хлористый, МРТУ 6-09-5362-68.
2.30. Натрий углекислый кислый по ГОСТ 4201-79.
2.31. Натрий сернокислый пиро по ГОСТ 18344-78, хч.
2.32. Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.
2.33. Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, хч.
2.34. Гексан, МРТУ 6-09-2937-66, хч.
2.35. Бензол по ГОСТ 5955-75.
2.36. Ацетонитрил по ТУ 6-09-3534-74.
2.37. Аммиак водный по ГОСТ 3760-79.
2.38. Диметиламин хлоргидрат по ТУВЗ 30-65, ч.
2.39. Диэтиламин, ТУ 6-09-682706, хч.
2.40. Дипропиламин, ч.
2.41. Дибутиламин, ТУ 6-09-1802-72, хч.
2.42. Пиперидин, ТУ 1011-232-68, чда.
2.43. Пирролидин, ТУ ЛРЗ 134-65, ч.
2.44. Азот газообразный особой чистоты.
2.45. 8-метокси-5-хинолинсульфонилазиридин. Институт биологической и медицинской химии АМН СССР гарантирует снабжение лабораторий СЭС необходимым количеством реактива.
Замечание. В работе рекомендуется использовать свежеперегнанные растворители.

3. Подготовка к анализу

3.1. Подготовка образца пищевого продукта.
50-100 г продукта, взвешенного с точностью до г, измельчают в мясорубке или гомогенизаторе. Навеску переносят в круглодонную колбу на 500 мл, соединенную с паровиком и прямым холодильником (см. рис). К продукту добавляют 10 г хлористого натрия, 10 г сульфата натрия или магния, 5-10 мл 2 н раствора гидроокиси натрия до рН > 8, 25-100 мл дистиллированной воды в зависимости от влажности продукта и НА отгоняют с паром, собирая 150 мл дистиллята. Полученный дистиллят вновь переносят в перегонную колбу, добавляют 2-5 мл 2 н раствора серной кислоты до рН < 3,10 г хлористого натрия или сульфата магния и НА отгоняют с водяным паром, собирая 100 мл дистиллята. Последний переносят в делительную воронку и НА экстрагируют хлористым метиленом 5-6 раз по 15 мл. Объединенные экстракты высушивают прокаленным сульфатом магния и затем концентрируют по 2 мл упариванием в токе азота при 30°С или на роторном испарителе при Р = 30 мм рт. ст. и 25°С. Количество экстракта делят на две равные части (раствор А и раствор Б).
Одну часть раствора (раствор А) денитрозируют добавлением 0,1 мл 31%-ного раствора НВr/АсОН и выдерживанием этого раствора в течение 30 мин при комнатной температуре, после чего раствор упаривают на роторном испарителе досуха, Р = 10-15 мм рт. ст., Т = 40-50°С. К остатку добавляют 0,2 мл 1%-ного раствора углекислого кислого натрия, 0,1 мл спиртового раствора, содержащего 10 мкг КАЗ (концентрация рабочего раствора КАЗ 10 мг/100 мл спирта) и кипятят 30 мин. При определении содержания НА в солоде и пиве добавляют 1,5 мл рабочего раствора КАЗ. Реакционную смесь упаривают досуха и к остатку добавляют 0,1 мл этанола. Для анализа используют 10-20 мкл раствора. Полученные КАЭ-производные аминов содержание которых эквивалентно количеству НА в пробе, анализируют методом ТСХ в сравнении со стандартами.
Для проведения "холостой пробы" ко второй части хлорметиленового экстракта (раствор Б) добавляют 0,1 мл рабочего раствора КАЗ, 0,2 мл 1%-ного раствора углекислого кислого натрия и кипятят 30 мин. Обрабатывают аналогично раствору А. Полученный спиртовой раствор анализируют методом ТСХ. Результаты "холостого опыта" учитывают при расчете содержания НА в продовольственном сырье и пищевых продуктах.
3.2. Приготовление стандартных растворов.
В круглодонные колбы на 50 мл помещают по 5 мл этанола, вносят соответствующие амины: диметиламин хлоргидрат ( ) - 5,5 мг, диэтиламин (ДЭА) - 5,1 мкл, дипропиламин (ДПА) - 5,2 мкл, дибутиламин (ДБА) - 5,35 мкл, пиперидин (Пип) - 4,3 мкл, пирролидин (Пир) - 4,15 мкл и в каждую колбу добавляют по 20 мг КАЗ. В колбу, содержащую ДМА НСl, прибавляют 9,6 мг углекислого кислого натрия и 5 мл воды. Смеси кипятят 30 мин с обратным холодильником, упаривают на роторном испарителе (Р = 10-16 мм рт.ст., Т = 40-50°С) до 3-4 мл, содержимое колб переносят в мерные пробирки, реакционные колбы ополаскивают этанолом и объем доводят до метки 5 мл. Получают растворы с концентрацией мг/мл в пересчете на каждый НА. Для получения растворов рабочей концентрации мг/мл 2,5 мл каждого стандартного раствора с концентрацией переносят в мерные колбы на 25 мл и доводят до метки этанолом. Для получения смеси стандартов в мерную колбу на 25 мл помещают по 2,5 мл каждого раствора КАЭ-производного с концентрацией и раствор доводят до метки этанолом. Концентрация каждого стандартного производного в этой смеси тоже равна мг/мл. Для получения смеси стандартов меньших концентраций и в мерные колбы на 25 мл помещают соответственно 2,5 и 1,25 мл стандартного раствора и растворы доводят до метки этанолом. Концентрация каждого стандарта в этих смесях соответственно равна нг/мкл и нг/мкл.

4. Проведение анализа и обработка результатов

4.1. Тонкослойная хроматография.
4.1.1. Подготовка пластинок для хроматографического анализа.
Пластинку "Силуфол" размером 15x15 см помещают в камеру для хроматографии, в которую предварительно наливают смесь бензол-этилацетат-уксусная кислота(100:50:1) (система 1). Развитие хроматограммы проводят до достижения растворителем верхнего края пластинки. Затем пластинку извлекают из камеры, сушат 10 мин на воздухе, помещают в сушильный шкаф и активируют при 110-120°С в течение часа. Для анализа требуется несколько пластинок, которые после активирования до использования хранят в закрытом эксикаторе над хлористым кальцием.
4.1.2. Проведение тонкослойной хроматографии, идентификация НА и количественное определение.
На расстоянии 3 см от нижнего края пластинки проводят карандашом тонкую горизонтальную линию, на которую с интервалом в 1,3 см наносят 10 точек. В первую точку наносят 10-20 мкл исследуемого раствора А, во вторую - 10-20 мкл раствора Б, в последующие 6 точек - по 1 мкл каждого стандартного раствора КАЭ-производных с концентрацией , а в 9 и 10 точки наносят по 4 мкл растворов и .
При определении содержания НА в солоде и пиве в 9 и 10 точки наносят соответственно 1 и 3 мкл раствора . Пластинку поворачивают на 180° и помещают в хроматографическую камеру с системой 1. Развитие хроматограммы проводят до достижения верхнего края пластинки. Пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе 15 мин, срезают 2 см ниже фронта, тем самым удаляя избыток реагента и липофильные примеси, переворачивают на 180° и помещают в хроматографическую камеру со смесью ацетонитрил - 25%-ный аммиак (9:1) (система 2). Уровень растворителя должен быть примерно на 1 см ниже нанесенных пятен. Развитие хроматограммы проводят до достижения растворителем верхнего края пластинки. Пластинку сушат на воздухе и вновь помещают в хроматографическую камеру с системой 1. Хроматографируют в том же направлении, сушат и рассматривают в УФ-свете (лампа ОЛД-41 или прибор для флуоресцентного анализа витаминов, модель 833). Сравнивая подвижность флуоресцирующих производных, которые обнаружены в образце, с подвижностью соответствующих КАЭ-производных стандартов, осуществляют идентификацию НА.
Сравнивая интенсивность флуоресценции различных количеств стандартных НА с интенсивностью флуоресценции образца и "холостого опыта", определяют количество НА в пробе. При этом содержание НА в пробе рассчитывают по следующей формуле:
мкг/кг,
где K - количество НА в продовольственном сырье или пищевом продукте, мкг/кг,
N - количество НА в пробе с учетом "холостого опыта", мкг,
П - навеска продукта, кг,
- объем анализируемой пробы, мкл,