Флуороскопический визуальный метод

Приготовление шкалы стандартных растворов

100 мг чистого кристаллического тиаминхлорида-гидрохлорида растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе, вместимостью 1 . Раствор хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой на холоду не более 1 мес. Из этого раствора приготовляют путем разведения стандартные рабочие растворы в мерных колбах вместимостью 100 по табл. 3.

Номер стандартного раствора	Количество основного раствора,	Количество добавленной воды,	Содержание витамина (тиаминхлорид-гидрохлорида) в 1 полученного стандартного раствора,
1	0,1	до 100	0,1
2	0,2	" 100	0,2
3	0,3	" 100	0,3
4	0,4	" 100	0,4
5	0,5	" 100	0,5
6	0,6	" 100	0,6
7	0,7	" 100	0,7
8	0,8	" 100	0,8
9	0,9	" 100	0,9
10	1,0	" 100	1,0
11	1,2	" 100	1,2
12	1,4	" 100	1,4
13	1,6	" 100	1,6
14	1,8	" 100	1,8
15	2,0	" 100	2,0

Из каждого рабочего стандартного раствора отбирают по 1 в капельные или делительные воронки вместимостью 50 или в цилиндры с притертой пробкой и добавляют при помощи градуированных пипеток по 4 дистиллированной воды, по 3 окислительной смеси, сильно встряхивают, прибавляют 12 изобутилового или другого рекомендованного спирта из бюретки и встряхивают в течение 2 мин. После разделения водной и спиртовой фаз водную нижнюю фазу удаляют, а в спиртовую фазу добавляют около 0,5 г сернокислого натрия или 2 этилового спирта. После перемешивания и отстаивания отбирают 10 этого раствора и переносят в пробирку для последующего определения флуоресценции. Пробирку закрывают корковой пробкой и сохраняют в темноте.

Примечание. Стандартные растворы тиохрома могут храниться в темноте на холоду в течение двух дней.

Определение в кристаллическом препарате, в драже и таблетках

При анализе витаминных препаратов (кристаллический витамин , драже и таблетки) вначале необходимо выяснить природу галоида, входящего в состав молекулы витамина; для этого проводят качественную реакцию на ионы брома и хлора с раствором азотнокислого серебра; при наличии хлорида выпадает белый, а при наличии бромида - желтоватый осадок.

Примечание В случае анализа витаминных препаратов, содержащих аскорбиновую кислоту, реакцию проводят после предварительного озоления препарата в присутствии поташа или концентрированной серной кислоты

Навеску кристаллического препарата, предварительно высушенного в вакуум-эксикаторе над концентрированной серной кислотой в течение не менее 12 ч берут на аналитических весах в количестве 100 мг и растворяют в 1 дистиллированной воды.

При анализе драже или таблеток взвешивают 30-50 шт. и определяют массу одной штуки, как среднее арифметическое. Отобранную пробу тщательно растирают в ступке и из растертой массы берут на аналитических весах две параллельные навески, около 1 г каждая. Навески количественно переносят в мерные колбы вместимостью на 100 , растворяют в воде и доводят раствор до метки; при наличии мути раствор фильтруют.

Из полученных основных растворов (кристаллического препарата, драже или таблеток) приготовляют путем дополнительного разведения рабочие растворы с таким расчетом, чтобы в растворе, поступающем на окисление, содержалось от 1 до 2 витамина в 1 . Из полученных растворов отбирают три пробы по 1 в делительные или капельные воронки или в цилиндры с притертыми пробками, туда же добавляют по 4 дистиллированной воды и перемешивают. К двум пробам добавляют по 3 окислительной смеси, к третьей (контрольной) - 3 15%-ного раствора щелочи.

Пробы встряхивают, добавляют в каждую по 12 изобутилового, изоамилового или бутилового спирта и встряхивают 2 мин, после чего спиртовому и водному слою дают отстояться. Водную нижнюю фазу удаляют, а в спиртовую добавляют около 0,5 г сернокислого натрия или 2 этилового спирта и после перемешивания отбирают 10 в пробирки для определения флуоресценции. Окисленные растворы необходимо предохранять от яркого света и тотчас проводить измерение интенсивности флуоресценции.

Пробирки с испытуемыми растворами помещают перед светофильтром ртутно-кварцевой лампы и сравнивают интенсивность флуоресценции со шкалой стандартов: для этого одну из пробирок с испытуемым раствором помещают между двумя соседними пробирками со стандартными растворами, останавливаясь на той, которая по интенсивности флуоресценции совпадает с испытуемой. Если интенсивность флуоресценции окажется между интенсивностью флуоресценции соседних стандартных пробирок, то берется средняя величина.

Аналогично поступают с растворами контрольного опыта (пробирки с раствором без окислителя).

Содержание (чистота) витамина в кристаллических препаратах (X) в процентах вычисляют по формуле

где С - количество витамина в 1 , стандартного раствора в , флуоресценция которого совпадает с флуоресценцией испытуемого раствора;

- количество витамина в 1 стандартного раствора в , флуоресценция которого совпадает с флуоресценцией контрольного опыта;

m - навеска, г;.

V - объем, в котором растворена навеска, ;

- объем, взятый для приготовления рабочего раствора, ;

- конечный объем рабочего раствора, ;

- объем рабочего раствора, взятый па окисление, ;

100 - пересчет на проценты.

Содержание витамина на одну штуку драже или таблеток (X), мг, вычисляют по формуле

где р - средняя масса одной штуки драже или таблеток, г;

1000 - коэффициент пересчета, мг.

(Остальные обозначения см. выше).

Точность метода .

Примечание. В случае анализа препаратов с тиаминбромидом-гидробромидом необходимо ввести коэффициент 1,29, умножая на него полученный результат.

27. Применяемые реактивы

а) Рибофлавин кристаллический.

б) Стандартный раствор рибофлавина (А): 40 мг кристаллического рибофлавина растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 при нагревании (или 10 мг на 250 ), по охлаждении раствор доводят до метки. 1 раствора содержит 40 рибофлавина. Раствор хранят в темноте на холоду не более 1 мес.

Перед анализом приготовляют рабочий раствор (Б), для чего 20 раствора А помещают в мерную колбу вместимостью на 100 и доводят водой до метки.

B 1 раствора Б содержится 8 рибофлавина.

28. Необходимая аппаратура:

Колориметр типа Дюбоска или электрофотоколориметр.

29. Описание определения

Колориметрический метод определения в кристаллических препаратах, драже и таблетках

При анализе кристаллических препаратов берут навеску препарата в количестве 40 мг на 1 (или 10 мг на 250 ) дистиллированной воды и растворяют так, как указано при приготовлении стандартных растворов.

При анализе драже или таблеток взвешивают 30-50 шт. и определяют массу одной штуки, как среднее арифметическое. Отобранную пробу тщательно растирают в ступке и из растертой массы берут на аналитических весах 2 параллельные навески, около 1 г каждая. Навески растворяют в дистиллированной воде в мерных колбах вместимостью 100 или 250 (в зависимости от предполагаемого содержания витамина ) с таким расчетом, чтобы в 1 раствора содержалось около 8 витамина . Растворы доводят до метки водой, фильтруют и интенсивность окраски измеряют в колориметре типа Дюбоска, сравнивая со стандартным раствором витамина , или в электрофотоколориметре.

При использовании электрофотоколориметра применяют светофильтр 470 и составляют калибровочную кривую по стандартному раствору, разведенному дистиллированной водой до различных концентраций по принципу, изложенному в разделе II (1 ( , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 и 8 в 1 ).

Содержание (чистота) витамина в кристаллических препаратах (X) в процентах вычисляют по формуле:

При использовании колориметра типа Дюбоска

где С - количество витамина в 1 стандартного раствора, ;