23. Определение витамина Д в спиртовых концентратах

Высокоактивные спиртовые концентраты предварительно разбавляют спиртом с таким расчетом, чтобы в 1 содержалось не более 10000 ин. ед. витамина Д. Из разбавленного спиртового раствора отбирают пипеткой 1 помещают в небольшую колбу Вюрца и отгоняют растворитель на водяной бане досуха в токе углекислого газа или азота.

Полученный остаток растворяют в хлороформе и переносят в мерную колбу такого объема, чтобы в 1 раствора содержалось от 200 до 1000 ин. ед. витамина Д.

Из полученного раствора отбирают 1 , помещают в кювету электрофотоколориметра или штуфенфотометра, туда же добавляют 3 капли ацетилхлорида и 6 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы. Точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют интенсивность образовавшейся, окраски с указанным выше светофильтром.

В качестве контроля для установки прибора на нуль используют раствор, состоящий из 1 хлороформа, 6 раствора треххлористой сурьмы и 3 капель ацетилхлорида.

Расчет содержания витамина Д в 1 концентрата (X) в ин. ед. производят по формуле.

где С - найденное по калибровочной кривой количество витамина Д в 1 раствора, ин. ед.;

V - разведение, ;

m - количество взятого на анализ концентрата, .

24. Применяемые реактивы

а) Тиаминхлорид-гидрохлорид 100%-ной чистоты с температурой плавления 246 - 250°С. Если нужно, его перекристаллизовывают 2 раза из 80%-ного этилового спирта, высушивают в вакуум-эксикаторе над серной кислотой и хранят в эксикаторе, в темноте.

б) Красная кровяная соль. После перекристаллизации из дистиллированной воды из нее перед анализом приготовляют 1%-ный водный раствор.

в) Натр едкий х.ч. 30%-ный водный раствор; 15%-ный водный раствор.

г) Окислительная смесь: перед анализом смешивают 4 1%-ного раствора красной кровяной соли с 96 15%-ного раствора едкого натра.

д) Изобутиловый спирт с температурой кипения 107-108°С, изоамиловый спирт с температурой кипения 130°С или бутиловый-спирт с температурой кипения 117°С (употребляется любой из указанных спиртов).

е) Этиловый спирт, ректификованный 96%-ный.

Примечание. В случае наличия флуоресценции спирты перед употреблением подвергают очистке: к 1 спирта прибавляют 15-20 г активированного угля, встряхивают 15 мин, оставляют на сутки, повторяя несколько раз встряхивание. Декантируют, фильтруют, высушивают над хлористым кальцием и перегоняют при соответствующей температуре (перегонку изобутилового, изоамилового и бутилового спирта ведут на глицериновой или песчаной бане, а этилового - на водяной бане).

ж) Натрий сернокислый безводный, прокаленный.

з) Калий марганцевокислый, х.ч.

и) Серебро азотнокислое, 10%-ный раствор.

Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.

25. Необходимая аппаратура

Флуороскоп: ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, помещенная в кожух с черным никелевым светофильтром с набором пробирок одинакового диаметра из однородного нефлуоресцирующего стекла.

26. Описание определения

Флуороскопический визуальный метод

Приготовление шкалы стандартных растворов

100 мг чистого кристаллического тиаминхлорида-гидрохлорида растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе, вместимостью 1 . Раствор хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой на холоду не более 1 мес. Из этого раствора приготовляют путем разведения стандартные рабочие растворы в мерных колбах вместимостью 100 по табл. 3.

Номер стандартного раствора	Количество основного раствора,	Количество добавленной воды,	Содержание витамина (тиаминхлорид-гидрохлорида) в 1 полученного стандартного раствора,
1	0,1	до 100	0,1
2	0,2	" 100	0,2
3	0,3	" 100	0,3
4	0,4	" 100	0,4
5	0,5	" 100	0,5
6	0,6	" 100	0,6
7	0,7	" 100	0,7
8	0,8	" 100	0,8
9	0,9	" 100	0,9
10	1,0	" 100	1,0
11	1,2	" 100	1,2
12	1,4	" 100	1,4
13	1,6	" 100	1,6
14	1,8	" 100	1,8
15	2,0	" 100	2,0

Из каждого рабочего стандартного раствора отбирают по 1 в капельные или делительные воронки вместимостью 50 или в цилиндры с притертой пробкой и добавляют при помощи градуированных пипеток по 4 дистиллированной воды, по 3 окислительной смеси, сильно встряхивают, прибавляют 12 изобутилового или другого рекомендованного спирта из бюретки и встряхивают в течение 2 мин. После разделения водной и спиртовой фаз водную нижнюю фазу удаляют, а в спиртовую фазу добавляют около 0,5 г сернокислого натрия или 2 этилового спирта. После перемешивания и отстаивания отбирают 10 этого раствора и переносят в пробирку для последующего определения флуоресценции. Пробирку закрывают корковой пробкой и сохраняют в темноте.

Примечание. Стандартные растворы тиохрома могут храниться в темноте на холоду в течение двух дней.

Определение в кристаллическом препарате, в драже и таблетках

При анализе витаминных препаратов (кристаллический витамин , драже и таблетки) вначале необходимо выяснить природу галоида, входящего в состав молекулы витамина; для этого проводят качественную реакцию на ионы брома и хлора с раствором азотнокислого серебра; при наличии хлорида выпадает белый, а при наличии бромида - желтоватый осадок.

Примечание В случае анализа витаминных препаратов, содержащих аскорбиновую кислоту, реакцию проводят после предварительного озоления препарата в присутствии поташа или концентрированной серной кислоты

Навеску кристаллического препарата, предварительно высушенного в вакуум-эксикаторе над концентрированной серной кислотой в течение не менее 12 ч берут на аналитических весах в количестве 100 мг и растворяют в 1 дистиллированной воды.

При анализе драже или таблеток взвешивают 30-50 шт. и определяют массу одной штуки, как среднее арифметическое. Отобранную пробу тщательно растирают в ступке и из растертой массы берут на аналитических весах две параллельные навески, около 1 г каждая. Навески количественно переносят в мерные колбы вместимостью на 100 , растворяют в воде и доводят раствор до метки; при наличии мути раствор фильтруют.

Из полученных основных растворов (кристаллического препарата, драже или таблеток) приготовляют путем дополнительного разведения рабочие растворы с таким расчетом, чтобы в растворе, поступающем на окисление, содержалось от 1 до 2 витамина в 1 . Из полученных растворов отбирают три пробы по 1 в делительные или капельные воронки или в цилиндры с притертыми пробками, туда же добавляют по 4 дистиллированной воды и перемешивают. К двум пробам добавляют по 3 окислительной смеси, к третьей (контрольной) - 3 15%-ного раствора щелочи.

Пробы встряхивают, добавляют в каждую по 12 изобутилового, изоамилового или бутилового спирта и встряхивают 2 мин, после чего спиртовому и водному слою дают отстояться. Водную нижнюю фазу удаляют, а в спиртовую добавляют около 0,5 г сернокислого натрия или 2 этилового спирта и после перемешивания отбирают 10 в пробирки для определения флуоресценции. Окисленные растворы необходимо предохранять от яркого света и тотчас проводить измерение интенсивности флуоресценции.

Пробирки с испытуемыми растворами помещают перед светофильтром ртутно-кварцевой лампы и сравнивают интенсивность флуоресценции со шкалой стандартов: для этого одну из пробирок с испытуемым раствором помещают между двумя соседними пробирками со стандартными растворами, останавливаясь на той, которая по интенсивности флуоресценции совпадает с испытуемой. Если интенсивность флуоресценции окажется между интенсивностью флуоресценции соседних стандартных пробирок, то берется средняя величина.

Аналогично поступают с растворами контрольного опыта (пробирки с раствором без окислителя).

Содержание (чистота) витамина в кристаллических препаратах (X) в процентах вычисляют по формуле

где С - количество витамина в 1 , стандартного раствора в , флуоресценция которого совпадает с флуоресценцией испытуемого раствора;

- количество витамина в 1 стандартного раствора в , флуоресценция которого совпадает с флуоресценцией контрольного опыта;

m - навеска, г;.

V - объем, в котором растворена навеска, ;

- объем, взятый для приготовления рабочего раствора, ;

- конечный объем рабочего раствора, ;