Действующий
Для проведения электрофотоколориметра к нулю пользуются хлороформенным раствором треххлористой сурьмы. Для получения точек калибровочной кривой берут 1,0; 0,75; 0,5 и 0,25 стандартного раствора витамина Д, доводят хлороформом до объема 1 , добавляют по 3 капли ацетилхлорида и 6 раствора треххлористой сурьмы. Отношение испытуемого раствора к раствору треххлористой сурьмы составляет 1:6.
Общий объем реакционной смеси должен составлять 7 .
Точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют получаемые окраски и величины экстинкции откладывают на графике по оси ординат, а соответствующие концентрации витамина Д - по оси абсцисс.
В пределах содержания витамина Д от 200 до 1000 ин. ед. в 1 на графике получается прямая линия.
22. Определение витамина Д в масляных концентратах с омылением
Навеску концентрата, в количестве 0,5-2 г, в зависимости от содержания витамина Д, взятую на аналитических весах, помещают в колбу, снабженную обратным холодильником, и подвергают омылению на водяной бане при помощи 10 10%-ного спиртового раствора КОН в течение 1 ч при температуре кипения спирта.
По охлаждении смеси к ней добавляют двойной объем дистиллированной воды, переносят в делительную воронку, смывают из колбы небольшими порциями воды и неомыляемую фракцию извлекают трижды серным эфиром, свободным от перекиси, используя первый раз 50 , второй и третий раз по 25 эфира.
Объединенные эфирные вытяжки тщательно промывают водой до полного удаления щелочи (проба на лакмусовую бумагу или фенолфталеин), отделяют водный слой, к эфирному экстракту добавляют 5-7 г свежепрокаленного сернокислого натрия и взбалтыванием колбы с содержимым высушивают вытяжку до полной прозрачности (в течение 15-20 мин).
Эфирную вытяжку фильтруют через бумажный фильтр; колбу и фильтр ополаскивают небольшим количеством эфира, сливая последний через тот же фильтр, и отгоняют эфир на водяной бане в токе углекислого газа или азота до получения сухого остатка. Остаток растворяют в чистом сухом хлороформе в мерной колбе подходящего объема с таким расчетом, чтобы в 1 раствора содержалось не менее 200 и не более 1000 ин. ед. витамина Д..
Из полученного раствора отбирают точно 1 в кювету электрофотоколориметра или штуфенфотометра, туда же добавляют 3 капли ацетилхлорида и 6 хлороформенного раствора треххлористой сурьми (отношение 1:6) и точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют интенсивность образовавшейся окраски с указанным выше светофильтром.
В,качестве контроля для установки прибора на нуль используют раствор, состоящий из 1 хлороформа, 6 раствора треххлористой сурьмы и 3 капель ацетилхлорида.
Расчет содержания витамина Д в 1 концентрата (X) в ин. ед. производят по формуле
,
где С - найденное по калибровочной кривой количество витамина Д в 1 раствора, ин. ед.;
V- разведение ;
m - навеска концентрата, г;
d - плотность концентрата.
При определении витамина Д в масляных растворах с содержанием до 10000 ин. ед. в 1 надо вносить поправку на вещества, содержащиеся в неомыляемой фракции рафинированного подсолнечного масла, дающие такую же, как витамин Д, окраску с треххлористой сурьмой. При вычислении содержания витамина Д в вышеуказанных масляных растворах уменьшают полученные данные на 25%.
23. Определение витамина Д в спиртовых концентратах
Высокоактивные спиртовые концентраты предварительно разбавляют спиртом с таким расчетом, чтобы в 1 содержалось не более 10000 ин. ед. витамина Д. Из разбавленного спиртового раствора отбирают пипеткой 1 помещают в небольшую колбу Вюрца и отгоняют растворитель на водяной бане досуха в токе углекислого газа или азота.
Полученный остаток растворяют в хлороформе и переносят в мерную колбу такого объема, чтобы в 1 раствора содержалось от 200 до 1000 ин. ед. витамина Д.
Из полученного раствора отбирают 1 , помещают в кювету электрофотоколориметра или штуфенфотометра, туда же добавляют 3 капли ацетилхлорида и 6 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы. Точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют интенсивность образовавшейся, окраски с указанным выше светофильтром.
В качестве контроля для установки прибора на нуль используют раствор, состоящий из 1 хлороформа, 6 раствора треххлористой сурьмы и 3 капель ацетилхлорида.
Расчет содержания витамина Д в 1 концентрата (X) в ин. ед. производят по формуле.
,
где С - найденное по калибровочной кривой количество витамина Д в 1 раствора, ин. ед.;
V - разведение, ;
m - количество взятого на анализ концентрата, .
VI. Методы определения витамина
24. Применяемые реактивы
а) Тиаминхлорид-гидрохлорид 100%-ной чистоты с температурой плавления 246 - 250°С. Если нужно, его перекристаллизовывают 2 раза из 80%-ного этилового спирта, высушивают в вакуум-эксикаторе над серной кислотой и хранят в эксикаторе, в темноте.
б) Красная кровяная соль. После перекристаллизации из дистиллированной воды из нее перед анализом приготовляют 1%-ный водный раствор.
в) Натр едкий х.ч. 30%-ный водный раствор; 15%-ный водный раствор.
г) Окислительная смесь: перед анализом смешивают 4 1%-ного раствора красной кровяной соли с 96 15%-ного раствора едкого натра.
д) Изобутиловый спирт с температурой кипения 107-108°С, изоамиловый спирт с температурой кипения 130°С или бутиловый-спирт с температурой кипения 117°С (употребляется любой из указанных спиртов).
е) Этиловый спирт, ректификованный 96%-ный.
Примечание. В случае наличия флуоресценции спирты перед употреблением подвергают очистке: к 1 спирта прибавляют 15-20 г активированного угля, встряхивают 15 мин, оставляют на сутки, повторяя несколько раз встряхивание. Декантируют, фильтруют, высушивают над хлористым кальцием и перегоняют при соответствующей температуре (перегонку изобутилового, изоамилового и бутилового спирта ведут на глицериновой или песчаной бане, а этилового - на водяной бане).
ж) Натрий сернокислый безводный, прокаленный.
з) Калий марганцевокислый, х.ч.
и) Серебро азотнокислое, 10%-ный раствор.
Все применяемые реактивы должны соответствовать требованиям действующих стандартов или технических условий.
25. Необходимая аппаратура
Флуороскоп: ртутно-кварцевая лампа ПРК-2 или ПРК-4, помещенная в кожух с черным никелевым светофильтром с набором пробирок одинакового диаметра из однородного нефлуоресцирующего стекла.
26. Описание определения

Флуороскопический визуальный метод

Приготовление шкалы стандартных растворов

100 мг чистого кристаллического тиаминхлорида-гидрохлорида растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе, вместимостью 1 . Раствор хранят в склянке темного стекла с притертой пробкой на холоду не более 1 мес. Из этого раствора приготовляют путем разведения стандартные рабочие растворы в мерных колбах вместимостью 100 по табл. 3.
Таблица 3
Номер стандартного раствора
Количество основного раствора,
Количество добавленной воды,
Содержание витамина (тиаминхлорид-гидрохлорида) в 1 полученного стандартного раствора,
1
0,1
до 100
0,1
2
0,2
" 100
0,2
3
0,3
" 100
0,3
4
0,4
" 100
0,4
5
0,5
" 100
0,5
6
0,6
" 100
0,6
7
0,7
" 100
0,7
8
0,8
" 100
0,8
9
0,9
" 100
0,9
10
1,0
" 100
1,0
11
1,2
" 100
1,2
12
1,4
" 100
1,4
13
1,6
" 100
1,6
14
1,8
" 100
1,8
15
2,0
" 100
2,0
Открыть в новом окне
Из каждого рабочего стандартного раствора отбирают по 1 в капельные или делительные воронки вместимостью 50 или в цилиндры с притертой пробкой и добавляют при помощи градуированных пипеток по 4 дистиллированной воды, по 3 окислительной смеси, сильно встряхивают, прибавляют 12 изобутилового или другого рекомендованного спирта из бюретки и встряхивают в течение 2 мин. После разделения водной и спиртовой фаз водную нижнюю фазу удаляют, а в спиртовую фазу добавляют около 0,5 г сернокислого натрия или 2 этилового спирта. После перемешивания и отстаивания отбирают 10 этого раствора и переносят в пробирку для последующего определения флуоресценции. Пробирку закрывают корковой пробкой и сохраняют в темноте.