Примечание. При применении в ходе анализа вторичного разведения первоначального раствора или первоначального экстракта в числителе проставляют множитель в соответствии с п. 14е настоящего стандарта.

Модификация арбитражного метода (без применения сероводорода)

л) Начальную стадию анализа исследуемого объекта производят так, как это изложено в п. 14а, б и в настоящего стандарта.

После того как первоначальный раствор или экстракт обработай углекислым кальцием и раствором уксуснокислого свинца и затем отцентрифугирован или отфильтрован от образовавшегося осадка, следует проводить титрование жидкости по способу, изложенному в п. 14д настоящего стандарта.

м) В случае анализа окрашенных объектов, когда в результате обработки 5%-ным раствором уксуснокислого свинца согласно п. 14а, б и в настоящего стандарта не получаются достаточно обесцвеченные центрифугаты или фильтраты, применяют последовательно один из следующих приемов:

увеличивают объем титруемой жидкости до 30 вместо 15 путем добавления воды;

увеличивают количество уксуснокислого свинца вдвое, втрое или даже вчетверо (10; 15; 20 ) и соответственно увеличивают количество углекислого кальция, т.е. берут 0,8; 1,2; 1,6 г с последующим пропусканием через центрифугат или фильтрат сероводорода (п. 14г настоящего стандарта), если обесцвечивание при данных условиях не было достигнуто.

н) Вычисление результатов анализа производят по формуле, приведенной в п. 14к настоящего стандарта.

Упрощенный метод

о) Первоначальные растворы и первоначальные экстракты готовят согласно п. 14а, б и в настоящего стандарта с заменой уксусной кислоты раствором 2%-ной соляной кислоты или в случае анализа плодов шиповника и молока - дистиллированной водой. Из таких растворов или экстрактов отбирают пипеткой 1 - 10 (в зависимости от содержания витамина С), вносят в коническую колбу вместимостью 50-100 , куда заранее налито столько воды, чтобы общий объем жидкости равнялся 15 , и титруют 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, согласно п. 14д настоящего стандарта, без предварительной обработки углекислым кальцием и уксуснокислым свинцом.

Примечание. При анализе нерезко окрашенных продуктов титрование проводят в объеме не 15, а 30 , изменяя количество добавляемой воды. В этом случае титруют, сравнивая окраску титруемой жидкости с экстрактом, приготовленным для титрования.

п) При анализе сухих плодов шиповника навеску измельченных плодов количественно переносят в ступку с заранее внесенным туда стеклянным порошком (около 5 г), осторожно, тщательно и возможно мельче растирают, подливая небольшими порциями 300 дистиллированной воды комнатной температуры, и настаивают 10 мин. Из полученной взвеси после тщательного размешивания центрифугируют или фильтруют некоторую часть через слой ваты, вложенный в воронку.

В зависимости от содержания витамина С, руководствуясь первым титрованием, отбирают пипеткой от 1 до 5 центрифугата или фильтрата и переносят в колбу вместимостью 50-100 , куда заранее прилит 1 раствора 2%-ной соляной кислоты, затем прибавляют столько воды, чтобы общий объем жидкости в колбе был 15 , и титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола согласно п. 14д настоящего стандарта.

В случае окрашенности центрифугата или фильтрата, мешающей уловить появление розового окрашивания, а также при высоком содержании витамина С центрифугаты или фильтраты разводят перед титрованием водой вдвое или более.

Примечания:

1. В случае анализа незрелых плодов шиповника вместо воды для экстракции применяют 2%-ную соляную кислот)

2. При анализе плодов шиповника контрольными методами употребляют не 300 воды, а вдвое меньше.

р) При анализе молока 5 молока разводят в 3 раза дистиллированной водой (1:2). При разведении молоко отмеривают пипеткой, а дистиллированную воду наливают из бюретки вместимостью 25-50 . 5 полученного раствора вносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 25-50 , куда заранее наливают 1 2%-ной соляной кислоты и дистиллированной воды до общего объема в 15 ; затем, осторожно взбалтывая, содержимое колбы титруют из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, приливая последний каплями до появления слаборозового окрашивания, удерживающегося 0,5-1 мин. Для повторного титрования отбирают пробу из той же порции разведенного молока.

Примечания:

1. Молозиво разводят в 3-6 раз

2. В случае необходимости хранения молоко должно быть помещено в склянку темного стекла, закрытую пробкой

с) Содержание аскорбиновой кислоты (витамина С) (Х), мг%, вычисляют по формуле

где обозначения те же, что и в п. 14к настоящего стандарта.

Иодатный метод

т) Экстракцию витамина С из навески производят по методу, указанному в п. 14а, б и в настоящего стандарта, с заменой уксусной кислоты раствором 2%-ной соляной кислоты.

В случаях анализа продуктов твердой или густой консистенции из центрифугата или фильтрата солянокислых экстрактов отбирают 1-5 , в зависимости от содержания витамина С, определяемого первым титрованием, вносят в коническую колбу емкостью 50-100 , куда заранее налито 0,5 1%-ного раствора иодистого калия, 2 0,5%-ного раствора крахмала и столько воды, чтобы общий объем жидкости равнялся 10 ; затем титруют из микробюретки 0,001 н раствором иодноватокислого калия до появления стойкого слабосинего окрашивания.

Жидкие пробы разводят непосредственно перед титрованием соляной кислотой или водой или титруют без разведения; в последних случаях титрование производят в присутствии 1 2%-ной соляной кислоты.

Поправка на реактивы (контрольный опыт) производится следующим образом: в коническую колбу наливают 0,5 1%-ного раствора иодистого калия, 2 0,5%-ного раствора крахмала, 1 2%-ной НСl и столько воды, чтобы общий объем равнялся 10 и титруют 0,001 н,раствором до появления слабосинего окрашивания.

Допускается также применение при титровании 0,01 н раствора иодноватокислого калия.

у) Содержание аскорбиновой кислоты (витамина С) (X), мг%, вычисляют по формуле

где - количество 0,001 н раствора иодноватокислого калия, используемое на титрование, за вычетом поправки на реактивы, ;

- объем, до которого доведена навеска при прибавлении к ней экстрагирующей жидкости, ;

- количество экстракта, взятое для титрования, ;

F - поправка на титр иодноватокислого калия для перевода его на 0,001 н раствор, равная 1 при употреблении точно 0,001 н раствора;

m - навеска, г или объем, ;

0,088 - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 точно 0,001 н раствора иодноватокислого калия, мг.

IV. Методы определения витамина Д
(Биологический метод)

15. Предварительная обработка исследуемого объекта

а) Жидкие продуты (обогащенный витамином рыбий жир, препараты витамина в масле и в спирте). Среднюю пробу жидких продуктов разводят в растительном масле, не содержащем витамин (в подсолнечном масле). Для первого разведения берут пипеткой не менее 0,5 . Из первого разведения приготовляют путем дальнейшего разведения раствора, предназначенные для непосредственного скармливания крысам.

б) Твердые штучные изделия (драже с витамином Д, поливитаминное драже и т.д.).

Из средней пробы берут для анализа навеску на технохимических весах в количестве 20 г для поливитаминного драже, 15 г для граммового драже и 5 г мелкого драже.

Из навески извлекают витамин Д с помощью серного эфира, используя для этого 1-й раз - 100 , 2-й, 3-й и 4-й раз - по 50 эфира, после чего эфир отгоняют в токе углекислоты. Сухой остаток растворяют в подсолнечном масле.

Из полученного Д-витаминного раствора приготовляют соответствующие растворы, согласно выбранным рабочим дозам.

Разводки хранят в леднике в склянках, закрытых пробками. Каждую склянку снабжают этикеткой с указанием скармливаемой дозы исследуемого препарата.

16. Подготовка крыс

а) Опыты проводятся на белых крысах массой 40-50 г; крысы каждой семьи по возможности равномерно распределяются по группам в количестве не менее 10 в каждой группе.

б) Каждую крысу взвешивают при поступлении на опыт и на 16-й день опыта; при анализе результатов взвешиваний исключаются животные, потерявшие в течение опыта в массе.

в) Каждую крысу метят путем окрашивания различных участков тела.