в) Проведение определений

Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.

При определении сравнивают окраску пробирки с испытуемым раствором с окраской пробирок-эталонов через окошечко в передней части прибора, помещая его на белую бумагу.

Пробирку с испытуемым раствором устанавливают в неподвижной части прибора и подводят последовательно к ней пробирки эталоны путем передвижения шкалы.

Определение считают законченным, когда окраска испытуемого раствора совпадет с окраской раствора в одной из пробирок-эталонов.

Содержание витамина А в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталону.

Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках.

Наиболее точные результаты получают при колориметрировании раствора в пределах от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы разбавляют соответствующим образом хлороформом и проводят определение повторно.

Примечание. При необходимости получения большего объема колориметрируемого раствора можно увеличить его вдвое, втрое и больше, соответственно сохраняя указанное соотношение количества испытуемого раствора и треххлористой сурьмы.

г) Вычисление содержания витамина А

Количество витамина A ( ) в граммах на 1 г продукта вычисляют по формуле

где а - число синих единиц, установленное при колориметрировании;

V - объем раствора хлороформа, ;

m - навеска, г;

- коэффициенты пересчета в гаммы витамина А;

1000 - коэффициент пересчета в миллиграммы.

Количество витамина А ( ) в ин. ед. (интернациональных единицах) на 1 г продукта вычисляют по формуле

где 0,3 - коэффициент перевода числа гамм витамина А в ин. ед.

Остальные обозначения те же, что и в предыдущей формуле.

Б. Колориметрирование в электрофотоколориметре

а) Требования, предъявляемые к электрофотоколориметру. Электрофотоколориметры, применяемые для определения витамина А, должны соответствовать следующим требованиям:

обеспечить проведение измерения (отсчета) в течение 5-10 с;

обеспечить хорошую воспроизводимость результатов и пропорциональность отсчетов концентрации витамина А;

иметь достаточно монохроматический светофильтр с максимумом пропускания 620 м ;

иметь хорошо отрегулированный гальванометр с коротким периодом отклонений;

иметь набор одинаковых пробирок (кювет) из бесцветного стекла с внутренним диаметром 1 см.

Соответствующими вышеуказанным требованиям являются приборы конструкции Шипалова и фотоэлектрические колориметры ВНИВИ КФЭ-1.

Допускается пользование электрофотоколориметром ФЭК-М с компенсационной схемой.

б) Калибрование электрофотоколориметра. Точную навеску стандартизованного препарата витамина А растворяют в хлороформе. Указанный раствор, являющийся исходным, должен содержать 100 ин. ед. витамина А в 1 . Из него готовят затем 5-6 последовательных разведений с таким расчетом, чтобы во взятых для цветной реакции пробах отсчеты по гальванометру укладывались в пределах 40-65 делений шкалы гальванометра ( ).

Электрофотоколориметр устанавливают в рабочее положение подведением стрелки гальванометра к нулевой экстинкции по раствору треххлористой сурьмы с попеременным использованием двух пробирок, обладающих одинаковым пропусканием.

Примечание. Если электрофотоколориметр построен по компенсационной схеме, то раствор треххлористой сурьмы вносят в обе пробирки.

В одну из пробирок вносят точно отмеренное количество хлороформенного стандартного раствора, пробирку вставляют в гнездо прибора и быстро добавляют раствор треххлористой сурьмы. Показание гальванометра отмечают не позднее чем через 5-10 с после приливания раствора треххлористой сурьмы. Каждое определение проводят два раза с сохранением соотношения исследуемого раствора и треххлористой сурьмы, как 1:9. Суммарный объем жидкости устанавливают в соответствии с объемом кюветы и высотой световой щели.

в) Составление калибровочной кривой. Для составления калибровочной кривой откладывают по оси ординат найденные значения экстинкции ( ), по оси абсцисс - соответствующие им количества витамина А в интернациональных единицах. Калибровочная кривая должна практически представить собой прямую линию.

Примечание. Если калибровочная кривая имеет изгиб к оси абсцисс, то нельзя пользоваться тем отрезком кривой, в котором она сильно отклоняется от прямой линии, идущей от начала координат.

г) Определение витамина А в исследуемом, растворе. Определение производят, как описано в п. 10 Б, подпункт б "Калибрование электрофотоколориметра"; концентрацию раствора, взятого на определение, подбирают в зависимости от концентрации витамина А в анализируемом материале с таким расчетом, чтобы показание гальванометра (Д) укладывалось в пределы 40-65 делений шкалы.

Расчет содержания витамина А производят по калибровочной кривой. По показаниям гальванометра (Д) находят соответствующее значение экстинкции ( ) на таблице, прилагаемой в инструкциях к пользованию электрофотоколориметрами. С помощью калибровочной кривой непосредственно находят соответствующее найденной экстинкции содержание витамина А в интернациональных единицах. Полученное значение пересчитывают на разведение и на взятую навеску.

III. Методы определения витамина С

Настоящий раздел стандарта распространяется на методы определения витамина С в растительных объектах, витаминных препаратах (кроме синтетической аскорбиновой кислоты по нормативному документу по стандартизации), пищевых продуктах и готовой пище.

11. Навески

Примечания:

1. Для арбитражного анализа навески очищенных плодов шиповника берут из хорошо измельченной средней пробы (100 г) в количестве 10 г, в целых плодах - 20 г.

2. Те или иные величины навесок различных продуктов берутся в зависимости от большего или меньшего содержания в них витамина С.

3. Взвешивание навесок производят с точностью до 0,01 г, кроме навесок готовых блюд, которые взвешивают с точностью до 1 г.

12 Применяемые реактивы, приготовление их и установка титров

Кислота уксусная; 80%-ный раствор; 5%-й раствор (58 80%-ной уксусной кислоты доводят дистиллированной водой до 1 ).

Свинец уксуснокислый; насыщенный раствор; 5%-ный раствор на 5%-ной уксусной кислоте (недостаточно чистая соль свинца должна быть трижды перекристаллизована).

Кислота серная ч.; раствор 1:2 (по объему); раствор 1:4 (по объему); 0,02 н раствор (0,56 серной кислоты х.ч. плотностью 1,84 доводят дистиллированной водой до 1 ).