Действующий
Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой.
Типовые растворы приготовляют следующим образом: в 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта; из основного раствора, содержащего витамин А, путем разбавления водой приготовляют эталоны согласно приведенной ниже табл. 1.
Для объектов, содержащих мало витамина А, например, молоко, рекомендуется пользоваться пробирками с N 7 до N 21.
Номер пробирок | Количество,  | Число синих единиц | |
основного раствора | воды | ||
1 | 20 | 0,4 | 9 |
2 | 20 | 1,6 | 8,5 |
3 | 20 | 3 | 8 |
4 | 20 | 4,5 | 7,5 |
5 | 20 | 6,3 | 7 |
6 | 20 | 8,7 | 6,5 |
7 | 20 | 11,6 | 6 |
8 | 20 | 14,6 | 5,5 |
9 | 20 | 19 | 5 |
10 | 20 | 24,4 | 4,5 |
11 | 20 | 31,6 | 4 |
12 | 20 | 41,2 | 3,5 |
13 | 20 | 55,4 | 3 |
14 | 20 | 74,2 | 2,5 |
15 | 20 | 104,2 | 2,0 |
16 | 20 | 131 | 1,75 |
17 | 20 | 175 | 1,5 |
18 | 20 | 190 | 1,25 |
19 | 20 | 240 | 1 |
20 | 20 | 330 | 0,75 |
21 | Дистиллированная вода | ||
Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 
испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 
хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.
испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.
При определении сравнивают окраску пробирки с испытуемым раствором с окраской пробирок-эталонов через окошечко в передней части прибора, помещая его на белую бумагу.
Пробирку с испытуемым раствором устанавливают в неподвижной части прибора и подводят последовательно к ней пробирки эталоны путем передвижения шкалы.
Определение считают законченным, когда окраска испытуемого раствора совпадет с окраской раствора в одной из пробирок-эталонов.
Содержание витамина А в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталону.
Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках.
Наиболее точные результаты получают при колориметрировании раствора в пределах от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы разбавляют соответствующим образом хлороформом и проводят определение повторно.
Примечание. При необходимости получения большего объема колориметрируемого раствора можно увеличить его вдвое, втрое и больше, соответственно сохраняя указанное соотношение количества испытуемого раствора и треххлористой сурьмы.
) в граммах на 1 г продукта вычисляют по формуле
,
;
- коэффициенты пересчета в гаммы витамина А;
Количество витамина А (
) в ин. ед. (интернациональных единицах) на 1 г продукта вычисляют по формуле
) в ин. ед. (интернациональных единицах) на 1 г продукта вычисляют по формуле
,
а) Требования, предъявляемые к электрофотоколориметру. Электрофотоколориметры, применяемые для определения витамина А, должны соответствовать следующим требованиям:
обеспечить хорошую воспроизводимость результатов и пропорциональность отсчетов концентрации витамина А;
;
Соответствующими вышеуказанным требованиям являются приборы конструкции Шипалова и фотоэлектрические колориметры ВНИВИ КФЭ-1.
б) Калибрование электрофотоколориметра. Точную навеску стандартизованного препарата витамина А растворяют в хлороформе. Указанный раствор, являющийся исходным, должен содержать 100 ин. ед. витамина А в 1 
. Из него готовят затем 5-6 последовательных разведений с таким расчетом, чтобы во взятых для цветной реакции пробах отсчеты по гальванометру укладывались в пределах 40-65 делений шкалы гальванометра (
).
. Из него готовят затем 5-6 последовательных разведений с таким расчетом, чтобы во взятых для цветной реакции пробах отсчеты по гальванометру укладывались в пределах 40-65 делений шкалы гальванометра ( ).
Электрофотоколориметр устанавливают в рабочее положение подведением стрелки гальванометра к нулевой экстинкции по раствору треххлористой сурьмы с попеременным использованием двух пробирок, обладающих одинаковым пропусканием.
Примечание. Если электрофотоколориметр построен по компенсационной схеме, то раствор треххлористой сурьмы вносят в обе пробирки.
В одну из пробирок вносят точно отмеренное количество хлороформенного стандартного раствора, пробирку вставляют в гнездо прибора и быстро добавляют раствор треххлористой сурьмы. Показание гальванометра отмечают не позднее чем через 5-10 с после приливания раствора треххлористой сурьмы. Каждое определение проводят два раза с сохранением соотношения исследуемого раствора и треххлористой сурьмы, как 1:9. Суммарный объем жидкости устанавливают в соответствии с объемом кюветы и высотой световой щели.
в) Составление калибровочной кривой. Для составления калибровочной кривой откладывают по оси ординат найденные значения экстинкции (
), по оси абсцисс - соответствующие им количества витамина А в интернациональных единицах. Калибровочная кривая должна практически представить собой прямую линию.
), по оси абсцисс - соответствующие им количества витамина А в интернациональных единицах. Калибровочная кривая должна практически представить собой прямую линию.
Примечание. Если калибровочная кривая имеет изгиб к оси абсцисс, то нельзя пользоваться тем отрезком кривой, в котором она сильно отклоняется от прямой линии, идущей от начала координат.
г) Определение витамина А в исследуемом, растворе. Определение производят, как описано в п. 10 Б, подпункт б "Калибрование электрофотоколориметра"; концентрацию раствора, взятого на определение, подбирают в зависимости от концентрации витамина А в анализируемом материале с таким расчетом, чтобы показание гальванометра (Д) укладывалось в пределы 40-65 делений шкалы.