А. Колориметрирование в упрощенном приборе

а) Описание прибора

Упрощенный прибор (см. чертеж) представляет собой штатив с передвижной шкалой, в которую вставлено 15 пробирок-эталонов из бесцветного стекла. В неподвижной части штатива имеется отверстие для пробирки с испытуемым раствором и окошко, через которое сравнивают окраску последнего с растворами в пробирках-эталонах.

В пробирках-эталонах, имеющих диаметр 1 см и высоту 6 см, содержатся типовые растворы, представляющие собой смесь водных растворов сернокислой меди и азотнокислого кобальта.

Пробирки-эталоны должны быть закрыты пробками с прокладками из пергаментной бумаги и залиты менделеевской замазкой.

Размеры прибора:

длина подвижной шкалы с эталонами .............420 мм

ширина " " " " ..............25 "

высота " " " " ..............55 "

Размеры окошка - 40x35 мм.

б) Приготовление типовых растворов

Типовые растворы приготовляют следующим образом: в 500 мл воды растворяют 75 г сернокислой меди и 3,5 г азотнокислого кобальта; из основного раствора, содержащего витамин А, путем разбавления водой приготовляют эталоны согласно приведенной ниже табл. 1.

Для объектов, содержащих мало витамина А, например, молоко, рекомендуется пользоваться пробирками с N 7 до N 21.

800 × 1145 пикс.     Открыть в новом окне

Типовые растворы для пробирок-эталонов

Номер пробирок	Количество,		Число синих единиц
	основного раствора	воды
1	20	0,4	9
2	20	1,6	8,5
3	20	3	8
4	20	4,5	7,5
5	20	6,3	7
6	20	8,7	6,5
7	20	11,6	6
8	20	14,6	5,5
9	20	19	5
10	20	24,4	4,5
11	20	31,6	4
12	20	41,2	3,5
13	20	55,4	3
14	20	74,2	2,5
15	20	104,2	2,0
16	20	131	1,75
17	20	175	1,5
18	20	190	1,25
19	20	240	1
20	20	330	0,75
21	Дистиллированная вода

в) Проведение определений

Из приготовленного для колориметрирования хлороформенного раствора витамина А в пробирку, предназначенную для испытуемого раствора, отбирают 0,2 испытуемого раствора, добавляют туда же 1-3 капли уксусного ангидрида и 2 хлороформенного раствора треххлористой сурьмы и колориметрируют не позднее чем через 5-10 с.

При определении сравнивают окраску пробирки с испытуемым раствором с окраской пробирок-эталонов через окошечко в передней части прибора, помещая его на белую бумагу.

Пробирку с испытуемым раствором устанавливают в неподвижной части прибора и подводят последовательно к ней пробирки эталоны путем передвижения шкалы.

Определение считают законченным, когда окраска испытуемого раствора совпадет с окраской раствора в одной из пробирок-эталонов.

Содержание витамина А в испытуемом растворе будет соответствовать числу синих единиц, обозначенному на совпавшей по окраске пробирке-эталону.

Если окраска испытуемого раствора лежит между окрасками двух смежных пробирок-эталонов, берут среднее из значений синих единиц, обозначенных на этих пробирках.

Наиболее точные результаты получают при колориметрировании раствора в пределах от 4 до 6 синих единиц. Концентрированные растворы разбавляют соответствующим образом хлороформом и проводят определение повторно.

Примечание. При необходимости получения большего объема колориметрируемого раствора можно увеличить его вдвое, втрое и больше, соответственно сохраняя указанное соотношение количества испытуемого раствора и треххлористой сурьмы.

г) Вычисление содержания витамина А

Количество витамина A ( ) в граммах на 1 г продукта вычисляют по формуле

где а - число синих единиц, установленное при колориметрировании;

V - объем раствора хлороформа, ;

m - навеска, г;

- коэффициенты пересчета в гаммы витамина А;

1000 - коэффициент пересчета в миллиграммы.

Количество витамина А ( ) в ин. ед. (интернациональных единицах) на 1 г продукта вычисляют по формуле

где 0,3 - коэффициент перевода числа гамм витамина А в ин. ед.

Остальные обозначения те же, что и в предыдущей формуле.

Б. Колориметрирование в электрофотоколориметре

а) Требования, предъявляемые к электрофотоколориметру. Электрофотоколориметры, применяемые для определения витамина А, должны соответствовать следующим требованиям:

обеспечить проведение измерения (отсчета) в течение 5-10 с;

обеспечить хорошую воспроизводимость результатов и пропорциональность отсчетов концентрации витамина А;

иметь достаточно монохроматический светофильтр с максимумом пропускания 620 м ;

иметь хорошо отрегулированный гальванометр с коротким периодом отклонений;

иметь набор одинаковых пробирок (кювет) из бесцветного стекла с внутренним диаметром 1 см.

Соответствующими вышеуказанным требованиям являются приборы конструкции Шипалова и фотоэлектрические колориметры ВНИВИ КФЭ-1.

Допускается пользование электрофотоколориметром ФЭК-М с компенсационной схемой.

б) Калибрование электрофотоколориметра. Точную навеску стандартизованного препарата витамина А растворяют в хлороформе. Указанный раствор, являющийся исходным, должен содержать 100 ин. ед. витамина А в 1 . Из него готовят затем 5-6 последовательных разведений с таким расчетом, чтобы во взятых для цветной реакции пробах отсчеты по гальванометру укладывались в пределах 40-65 делений шкалы гальванометра ( ).

Электрофотоколориметр устанавливают в рабочее положение подведением стрелки гальванометра к нулевой экстинкции по раствору треххлористой сурьмы с попеременным использованием двух пробирок, обладающих одинаковым пропусканием.

Примечание. Если электрофотоколориметр построен по компенсационной схеме, то раствор треххлористой сурьмы вносят в обе пробирки.